岛津lc-10at型hplc操作规程2

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1、第一节岛津LC-10AT型HPLC操作规程1目的:规范岛津LC-10AT型高效液相色谱仪的使用。范围:适用于岛津LC-10AT型高效液相色谱仪的使用。职责:操作员对本规程的实施负责。2一、系统组成本系统由1个LC-10ATvp溶剂输送泵、Rheodyne7725i手动进样阀、SPD-10Avp紫外-可见检测器、N2000色谱数据工作站和电脑等组成，另外还包括打印机。3二、准备1、准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤，超声脱气20min。2、根据待检样品的需要更换合适的色谱柱（注意方向）和定量环。3、配制样品和标准溶液，用合适的0.45μm滤

2、膜过滤。（注意腐蚀性与有机系的的溶剂）4、检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。4接通电源，依次开启不间断电源、泵、检测器，待泵和检测器自检结束后，打开打印机、电脑显示器、主机，最后打开色谱工作站。三、开机5四、参数设定1、波长设定：在检测器显示初始屏幕时，按[func]键1次，波长数字键闪动，输入所需波长值，按[Enter]键确认。按[CE]键退出到初始屏幕。2、流速设定：在泵显示初始屏幕时，按[func]键，用数字键输入所需的流速（流速一般为超过1ml/min），按[Enter]键确认。按[CE]键退出6五、更换流动相并排气泡1：

3、将管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中；2：逆时针转动泵的排液阀180°，打开排液阀；3：按泵的[purge]键，pump指示灯亮，泵大约以9.9ml/min的高流速冲洗，3min（可设定）后自动停止，一般视管路无气泡即可。4：将排液阀顺时针旋转到底，关闭排液阀。5：如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。6：如按以上方法不能排尽气泡，从柱入口处拆下连接管，放入废液瓶中，设流速为5ml/min，按[pump]键，冲洗3min后再按[pump]键停泵，重新接上柱并将流速重设为规定值。7六、平衡系统1、查看基线：1.1：按《N2000色谱数

4、据工作站操作规程》打开“在线色谱工作站”软件，1.2：输入实验信息并设定各项方法参数后，1.3：按下“数据收集”页的[]按钮。8六、平衡系统2、2.1：按泵的[pump]键，泵启动，pump指示灯亮。用检验方法规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积的流动相。2.2：检查各管路连接处是否漏液，如漏液应予以排除。2.3：观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过1MPa。如超过则可初步判断为柱前管路仍有气泡，按检查管路后再操作。2.4：观察基线变化。如果冲洗至基线漂移<0.01mV/min，噪声为<0.001mV时，可认为系统已达到平衡状态，可以进样

5、。9七、进样1、进样前按检测器[zero]键调零，按软件中[零点校正]按钮校正基线零点，再按一下[查看基线]按钮使其弹起。2、用试样溶液清洗注射器，并排除气泡后抽取适量即可以进样了。3、含量测定的对照溶液和样品供试溶液每份至少进样2次。10八、谱图的判断及结果计算系统适用性实验：三个重要指标①分离度（加强）：一般应≥1.5。②重复性：两次谱图的峰面积应相差不超过1%。③理论塔板数：应≥规定的理论塔板数目。④拖尾因子：0.95＜T＜1.05⑤保留时间：对照与样品的主成分保留时间应大致一致。⑥RSD：＜3%11八、谱图的判断及结果计算1、内标法用含对照品

6、和内标物质的对照溶液所得色谱峰响应值，按下式算出校正因子（f）：其中As和Ar分别为内标物质和对照品的峰面积或峰高，ms和mr分别为加入内标物质和对照品的量。12八、谱图的判断及结果计算2、外标法：①用含对照品的对照溶液所得色谱峰响应值，按下式计算比值（r）：r=mr/Ar（其中mr和Ar分别为对照品的量和相应的峰面积或峰高。）②再根据供试品溶液的色谱峰响应值，计算供试品中被测成分的含量（mi）：mi=r×Ai（其中Ai为供试品溶液中被测成分的峰面积或峰高）。③必要时，再根据稀释倍数、取样量和标示量折算成标示量的百分含量，或根据稀释倍数、取样量折算成

7、百分含量。13九、清洗管路及进样口1、分析完毕后，先关检测器和数据处理机，再用经滤过和脱气的适当溶剂清洗色谱系统，正相柱一般用正已烷，反相柱如使用过含盐流动相，则先用水，然后用甲醇-水冲洗，冲洗前先按（4.1.1~4.1.2）操作，再用分析流速冲洗，各种冲洗剂一般冲洗15~30分钟，特殊情况应延长冲洗时间；并且用水冲洗密封圈三次。14九、清洗管路及进样口2、冲洗完毕后，逐步降低流速至0，关泵，进样器也应用相应溶剂冲洗，可使用进样阀所附专用冲洗接头。3、关断电源，作好使用登记，内容包括日期、检品、色谱柱、流动相、柱压，使用小时数，仪器完好状态等。15【

8、特殊情况】：谱流路系统，从泵、进样器、色谱柱、到检测器通池，在分析完毕后，均应按（5.1）充分冲洗，特别是用