欢迎来到天天文库
浏览记录
ID:19520913
大小:3.47 MB
页数:36页
时间:2018-10-03
《噻托溴铵文献报告ppt课件》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、噻托溴铵对哮喘模型小鼠气道炎症与气道重塑的治疗作用EffectoftiotropiumbromideonairwayinflammationandremodelinginamousemodelofasthmaFrom:ClinicalandExperimentalAllergy前言支气管哮喘是一种有嗜酸性粒细胞,肥大细胞和T淋巴细胞等多种炎性细胞参与的以气道慢性炎症为特征的疾病。这种气道炎症是易感者对各种激发因子具有气道反应性,并可引起气道狭窄,表现为反复发作性的喘息、呼吸困难、胸闷或咳嗽等症状。其存在的病因杂而多,包括遗传的、
2、环境的、药物的、精神的等等。前言哮喘的发病机制归结为四种:①变态反应②气道炎症③气道高反应性④神经机制内容研究背景1材料方法2实验结果3讨论4研究背景一、哮喘特征:①气流阻塞②气道炎症性③气道高反应性二、炎症细胞:①肥大细胞②淋巴细胞③嗜酸性粒细胞研究背景一、哮喘的典型活性介质:①IL—4②IL—5③IL—13④IFN—γ⑤TGF—β二、活性介质与哮喘的关系:①与Th1细胞的关系②与Th2细胞的关系③与嗜酸性粒细胞(EOS)的关系研究背景噻托溴铵(商品名思立华)是目前世界上推崇的新型抗胆碱能药物,它是一种季铵类抗胆碱能类支气管扩
3、张剂,对支气管扩张作用可持续24小时,明显改善喘鸣及气促的症状,显著提高肺功能。因而,本实验的目的是评估噻托溴铵是否可以抑制哮喘模型小鼠变态反应导致的急性与慢性气道炎症、Th2类型细胞因子产生以及气道重塑。实验材料与方法实验动物:BALB/c小鼠、雌性、6-8周、重量19-24g试剂:卵清蛋白(OVA)—Sigma噻托溴铵—BoehringerIngelheim4-二苯乙酰氧基-N-甲基-哌啶甲碘化物(4-DAMP)—BoehringerIngelheim实验流程图检测指标动物造模记录并分析结果给药↘↓↓↓↓BALF肺病理气道反
4、应离体细胞PBMCs急性和慢性气道炎症小鼠模型的建立↑Day0↑Day12↑Day0↑Day12↑↑↑Day21-23Day23-26↓↓↓↓↑↑↑↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↑↑↑Day21-63↑↑↑↑50μg/mouseOVAi.p.↓0.1mM(50μg/mL)Inhalationfor3min/mouse↑2.5%OVAinhalationfor20min/mouse气道反应的测量操作流程:麻醉
5、小鼠→插管→装箱→测量→记录结果计算公式:(吸入5-羟色胺后的气道阻力/吸入前的气道阻力)×100%支气管肺泡灌洗和细胞的分析操作流程:处死动物→钝性分离气管→固定气管→生理盐水冲洗→收集BALF→冰块保存→离心收集细胞→细胞冲洗与悬浮→细胞计数→细胞分类肺组织病理分析操作流程:提取BALF后→打开胸腔→剪取肺组织→PBS浸泡过夜→乙醇脱水→包蜡→染色显微镜观察→分析指标—上皮细胞增生、气道平滑肌增生、胶原纤维沉积、M3受体脾细胞因子的测量操作流程:分离脾细胞→悬浮培养→添加噻托溴铵→OVA(100μg/mL)刺激→获取培养上清
6、液→测量细胞因子培养液成分:RPMI1640、胎儿牛血清和抗生素细胞悬浮浓度:4.0×106个/mL.人类外周血单核细胞因子的测量操作流程:获取患者全血→分离PBMC→细胞培养→植物血凝素(PHA)激发→噻托溴铵治疗→获取细胞培养液上清→ELISA测量IL—5与IL—13分离方法:运用淋巴细胞分离器采取密度梯度离心法细胞因子的测量操作方法:酶联免疫吸附测定法(ELISA法)检测样品:BALF与细胞培养上清因子种类:IL—4、IL—5、IL—13、IFN—γ、TGF—β1实验结果一、对气道炎症反应的影响①噻托溴铵能有效地防止变态反
7、应导致的急性炎症反应②噻托溴铵能同样有效地抑制慢性哮喘模型小鼠的炎症反应实验结果二、对支气管肺泡灌洗液中Th2类型细胞因子水平的影响选取并被测量的细胞因子是IL—4、IL—5与IL—13,这三者与哮喘的发生和发展有着密切的关系。同时,慢性模型还考虑了TGF-β1,然而,噻托溴铵对模型小鼠中IgE的含量影响不大。实验结果三、对气道重塑的作用气道重塑涉及到上皮细胞增生、嗜酸性粒细胞募集、α-肌动蛋白增多、气道纤维化等病理改变,因而,可以从这几项指标检测噻托溴铵对气道重塑的改善作用。同时由于M3受体的发现,为阐明其作用机制提供可能的依
8、据。实验结果四、慢性哮喘模型小鼠气道高反应性气道高反应性是哮喘的典型特征,尤其在慢性哮喘中表现明显,这可通过测量气道阻力来反映是否具有气道高反应性。实验结果五、对脾细胞因子的含量的影响由于在BALF中已证实体内噻托溴铵对细胞因子的抑制作用,因而需进一步证明在体外
此文档下载收益归作者所有