液相色谱仪操作规程

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1、液相色谱仪操作规程一、流动相及样品的准备：1、流动相的选择：有机溶剂必须是色谱级，水必须是超纯水或二次蒸馏。2、流动相的配制：用乙腈70:水30的比例（例如：配制500ml流动相：即用350ml乙腈，加150ml水，混匀后放在滤器真空泵上用0.22μm的滤膜过滤。过滤完成后装在流动相专用瓶子内，放在超声波清洗器上超声脱气15—20分钟。3.超声脱气操作：将超声波清洗器上的三个旋钮调到最大，按下电源开关，然后按左边第一个按钮上的按键，机器开始工作。超声器使用前按（以下超声器的使用要求操作）规定超声结束后取出放冷至室温。注意：A根据待检测样品的需要更换合适的流动相时

2、在电脑上关掉泵开关。B要求样品溶液制备好后也用0.22μm的微孔滤膜过滤或在进样器上安装过芋滤头后才能进样。二、开机：1、开机顺序：接通电源，开启稳压电源、再在仪器上依次打开RID-20A(检测器)、CTO-20A（柱温箱）、LC-20AT(泵)按键，待自检结束（即以上三个仪器上的设定面板黄色灯灭）后，打开仪器LC-20AT输液泵上的排液阀（仪器显示器屏幕上的两行数字和字母变成一行时将排液阀逆时针旋转180度）后，按下设定面板上的Purge键，就可排出相应流路中的气泡，使新鲜的流动相在流路中得以置换，整个过程需要大概3分钟后，顺时针将排液阀旋转180度关闭。3、

3、打开打印机、电脑显示器、主机，最后点击电脑桌面上的Lc-solution图标，工作站开始联机，连上后能听到两次“嘀”的声音。证明泵、自动进样器、柱温箱、检测器全部已连接上。三、LC-solution操作界面的进入及系统的开启1、双击电脑桌面左侧从上至下第四个图标Lc-solution，弹出窗口后显示输入用户名ID及密码（一般不改），按“确定”仪器进入实时分析界面。桌面上部显黄色表框（仪器），双击旁边方框内蓝色图标。2、点击助手栏中的“仪器参数”进入仪器参数设置界面，出现坐表，设置采样时间，在桌面左下角点结束时间后修改数字，改时间依据为做标准曲线时的出峰时间而定。

4、（一般情况不改）。流动相流速从0.2、0.4、0.6、0.8慢慢往上加，加至1.0（第一次调整0.2后点下载后打开电脑中部？号后面仪器检测激活开关），柱温显示50。每次在完成后点击“下载”将分析参数传输至主机；打开桌面偏右上方？好前第四个图标自动冲洗开关（RID检测器）等待20分钟。3、分析方法的保存：选择文件→另存方法文件为→选择保存路径→取名保存文件。该方法即作为当前运行的方法。（一）、曲线制备：称取葡萄糖标样或标准品0.0125g、0.025g、0.05g、0.125g、0.25g稀释在25ml容量瓶中，相当于（0.5㎎，1.0㎎,2.0㎎,5.0㎎,10

5、.0㎎）或改变标准品称量相当于（1.0㎎、3.0㎎、5.0㎎、8.0㎎、10.0㎎）于25ml容量瓶内。﹙注；㎎浓度以容量瓶容量而定，先将容量瓶用超纯水冲洗后瓶内无水珠再用﹚用超纯水先稀释溶解定容至刻度线摇匀待用。（二）、样品的制备：先将50ml容量瓶用超纯水冲洗外部擦干后，将容量瓶放于电子天平上称重去皮，将所要测试的麦芽糖浆用玻棒或勺子将样品滴入容量瓶内一滴即可记下称重﹙注称样过程中注意样品不能滴到瓶外壁上或电子天平上以防称样不准﹚，将所称的样品用超纯水稀释溶解后定容至刻度摇匀。连同标准曲线制备的样品同时放在超声器中超声15分钟取出放至室温备用。（三）、超声器

6、的使用：将超声器电源接通，在超声器内加入一定量的蒸馏水（满过样品即可）。再用1000ml的烧杯内加入一定量的蒸馏水超声器开关进行超声15分钟取出放置室温备用。（满过样品即可），将样品瓶放在烧杯内保持平稳打开。注：1.一般为节省超声时间曲线标样与样品同时超声完成。2每新配一次流动相均需作曲线。3未换流动相时，可以直接只做样品代入以前计算方法计算结果。四、进样操作：进样：将制备好的样品用2.5ml的进样器（带上滤头）针头将样品吸入、排出3次进行清洗结束后，吸取样品满管后针头向上进行第一步弹指排气，再将进样器活塞由下向上推带针头不断流出液体后用滤纸吸干针头多余液体。将

7、进样针头平行缓慢插入进样孔，将进样阀﹙即仪器正面中间黑色手柄逆时针旋转45°后推入进样器活塞。待进样口旁小瓶内开始不断有液体流出3-5滴时证明样已进满，停止进样。立即将进样手柄顺时针向下旋转45°回复原位。电脑桌面显示正在分析，仪器进入分析期间大概12分钟左右，此时电脑界面逐渐出现坐标方框显峰。等待过程中可用进样器针头清洗第二个样品，待界面黑色线走向下方时间12.5min时左侧单次分析图标显示点亮，证明第一个样品分析结束。先点击左侧单次分析图标，在界面方框修改文件夹名称，自动递增依次显示数值………，开始第二个样品进样过程。依次顺延至曲线标样大概5-6个分析结束。

8、五、曲线计算：1、数据处