体细胞核移植课件

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1、动物克隆体细胞核移植之主要内容：概念简介发展历史体细胞核移植技术的步骤体细胞核移植技术的应用前景新闻趣事哺乳动物核移植存在的问题展望一、简介动物克隆是一种通过核移植过程进行无性繁殖的技术。不经过有性生殖过程，而是通过核移植生产遗传结构与细胞核供体相同动物个体的技术，就叫做动物克隆。主要方法胚胎分割胚胎细胞核移植胚胎干细胞核移植胚胎嵌合体细胞核移植体细胞核移植概念：又称体细胞克隆，作为动物细胞工程技术的常用技术手段，即把体细胞移入去核卵母细胞中，使其重组并能发育为新的胚胎，这个胚胎最终发育为动物个体。原理：由于体细胞高度分化，恢复全能性困难，体细胞核移植的原理即是细胞核的全能性

2、。克隆动物：用核移植方法获得的动物称为克隆动物。二、历史“多莉”的诞生从一只成年母绵羊的乳腺中取出一个本身并没有繁殖功能的普通细胞，将这个细胞的基因分离出来备用；然后，再取出另一只母绵羊的未受精的卵细胞，将这个卵细胞的基因取出，换上第一只母绵羊乳腺细胞的基因，再将这个基因已被“调包”的卵细胞放电激活，使其开始像正常的受精卵那样进行细胞分裂；当细胞分裂进行一定连阶段、胚胎已经形成后，再将这个胚胎植到第三只母绵羊，经过正常的妊娠后产下“多莉”。“多莉”的诞生掀起克隆研究热潮1.1997年3月，即公布“多莉”培育成功后近1个月的时间里，美国、中国台湾和澳大利亚科学家分别发表了他们成

3、功克隆猴子、猪和牛的消息。不过，他们都是采用胚胎细胞进行克隆，其意义不能与“多莉”相比。2.同年7月，罗斯林研究所和PPL公司宣布用基因改造过的胎儿成纤维细胞克隆出世界上第一头带有人类基因的转基因绵羊“波莉”（Polly）。这一成果显示了克隆技术在培育转基因动物方面的巨大应用价值。“多莉”的诞生掀起克隆研究热潮3.1998年7月，美国夏威夷大学Wakayama等报道，由小鼠卵丘细胞克隆了27只成活小鼠，其中7只是由克隆小鼠再次克隆的后代，这是继“多利”以后的第二批哺乳动物体细胞核移植后代。此外，Wakayama等人采用了与“多利”不同的、新的、相对简单且成功率较高的克隆技术，

4、这一技术以该大学所在地而命名为“檀香山技术”4.1998年7月至1999年4月，东京农业大学、近畿大学、家畜改良事业团、地方（石川县、大分县和鹿儿岛县等）家畜试验场以及民间企业（如日本最大的奶商品公司雪印乳业等）纷纷报道，他们采用牛耳部、臀部肌肉、卵丘细胞以及初乳中提取的乳腺细胞克隆牛的成果。5.至1999年底，全世界已有6种类型细胞――胎儿成纤维细胞、乳腺细胞、卵丘细胞、输卵管/子宫上皮细胞、肌肉细胞和耳部皮肤细胞的体细胞克隆后代成功诞生。6.2000年6月，中国西北农林科技大学利用成年山羊体细胞克隆出两只“克隆羊”，但其中一只因呼吸系统发育不良而早夭。据介绍，所采用的克隆

5、技术为该研究组自己研究所得，与克隆“多利”的技术完全不同，这表明中国科学家也掌握了体细胞克隆的尖端技术。“多莉”的诞生掀起克隆研究热潮1、供体细胞的选择2、受体细胞的准备和去核3、体细胞核移植4、重构胚激活5、重构胚培养与移植三、体细胞核移植的操作步骤供体细胞的选择和处理在整个核移植体系中有着非常重大的意义，它不但影响重构胚的倍性、核的重编程、重构胚的发育，还决定着核移植胚胎发育的方向和命运。1、供体细胞的选择2、受体细胞的准备和去核用于核移植的受体细胞大体有三种，包括去除原核的合子、2-细胞期胚胎卵裂球和成熟卵母细胞。其中使用去核的MII期卵母细胞做受体是哺乳动物体细胞核移

6、植中使用最多的。其胞质中存在一类重要的蛋白因子，即成熟促进因子（MPF）维持着高水平的MPF活性细胞周期处于停滞状态，便于进行体外操作胞质环境接纳供体细胞的能力强为什么选择MII期的卵母细胞？2、受体细胞的准备和去核受体细胞的去核是能否成功完成核移植的一个限制因素，也是影响核移植效率的另一重要环节。卵母细胞的去核常用方法：（1）盲吸法（2）DNA染色示踪去核法3、体细胞核移植将供体细胞移植入受体细胞的方法主要有两种：（1）带下注射：是将供体细胞注射到卵周隙中，通过细胞融合使供体细胞核进入受体胞质中，这一方法注入供体细胞后必须保证细胞膜的完整性，才能使随后的融合成功。（2）胞质

7、内注射：将供体细胞核或者供体细胞直接注射到卵母细胞质中的一种方法。徒手克隆近年来，出现了不需显微操作仪的核移植方法即无透明带移植方法，也有称为“徒手克隆”的。其基本过程是在去核和融合前除去透明带，将胞质体－－供体细胞复合体进行电融合，构建重构胚。此技术耗材少，简单快速。用此技术已产出克隆牛，猪，羊4、重构胚激活进核移植形成的重组胚虽然染色体恢复了二倍性，但其胞质还停滞在卵母细胞的MII期状态，想要使其重新进入细胞周期并启动其发育程序，必须通过一定的外界刺激。方法：（1）电激活法（2）化学激活法（3）精子