黄芪对大鼠肝缺血再灌注损伤的影响

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1、万方数据·1368·黄芪对大鼠肝缺血再灌注损伤的影响殷涛毕旭东庞世刚李志(辽宁医学院附属第一医院普外科，辽宁锦州121001)(擒要】目的探讨黄芪对大鼠肝缺血再灌注损伤的影响。以及与缺血预处理(iP)作用效果的比较。方法清洁级健康雄性sD大鼠96只，随机分为假手术组、缺血再灌注组(IR组)、缺血预处理组(IP组)、黄芪组，每组又按再灌注时间(1⋯3624h)分为4个时相，每组各时相为6只。制作70％肝缺血再灌注模型，测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)水平；测肝组织髓过氧化物酶(MPO)含量；用免疫组化法检测IL·10、TNF—a表达；以及光镜及电镜观察大

2、鼠肝形态学变化。结果m，m、黄芪组ALT、AST、LDH和MPO含量均明显高于假手术组(P<0．01)。与m组相比，m、黄芪组各个时相点的值均下降(P(0．05)。与【P组比较，黄芪组各个时相点的值均降低(P<0．05)。IR、IP、黄芪组肝组织TNF—d、IL一10的阳性细胞表达率均比假手术组高(P

3、常。结论IP和黄芪都可减轻缺血再灌注对肝脏的损伤，且后者较前者效果好。(关键词】肝脏再灌注损伤；黄芪；缺血预处理[中图分类号】R285【文献标识码)A【文章编号】100$-9202(2011)惦-1368-04许多肝脏手术，特别是切除很大肝内病灶和肝移植，都需要一段缺血时间。血供恢复后，肝脏受到进一步的“打击”，加重缺血所造成的损伤，即所谓的肝缺血一再灌注损伤(HIRI)⋯。研究表明，HIRI也是导致术后器官衰竭的重要因素旺’。在以往的研究重点主要集中在钙超载和氧自由基等方面，白细胞特别是中性粒细胞、细胞因子等在肝缺血再灌注损伤中具有重要作用。有文献报道，在肝缺血前给予药物¨1或短暂缺血H

4、1的预处理，可对肝缺血过程中的缺血缺氧产生一定的耐受，进而减少对肝脏损伤。本实验建立了大鼠HIRI模型，用黄芪注射液于缺血前经尾静脉注入，以观察黄芪抗HIRI的防治效果，同时与缺血预处理(IP)组进行比较，并进而探讨黄芪抗肝缺血再灌注的机制。1材料与方法1．1实验动物清洁级健康雄性SD大鼠(由辽宁医学院实验动物中心提供)96只，体重200—250g，随机分为4组，即假手术组、IR、IP、黄芪组，再按再灌注l、3、6、24h分为4个时相，每组各时相为6只。1．2主要试剂黄芪注射液由黑龙江省珍宝岛制药有限公司生产(每支10Inl，相当于原药材20g，批号：20091002)。生化试剂乳酸脱氢酶

5、(LDH)、髓过氧化物酶(MPO)购自南京建成生物工程研究所。免疫组化试剂盒IL-IO、TNF．理购自北京博奥森生物技术有限公司。1．3实验方法1．3．1动物模型制作SD大鼠术前12h禁食，自由饮水。术前10％水合氯醛3．0ml／kg腹腔内注射麻醉。m组：取腹正中切口，按Yoshidome法”】，分离出肝十二指肠韧带，用无损伤动通讯作者：毕旭东(1969一)，男，副教授。硕士生导师，主要从事中西医结合治疗腹部外科疾病的研究。第一作者：殷涛(1984．)。男。在读硕士，主要从事中药治疗肝脏外科疾病研究。脉夹将肝中叶和左侧叶的动脉、门静脉和胆管一并阻断，造成70％肝缺血模型，40min后移走动

6、脉夹恢复血流，缺血前5min分别自尾静脉缓慢注射生理盐水3．0ml；假手术组：单纯麻醉和开腹，分离出肝十二指肠韧带，仅暴露肝中叶和左侧叶的肝蒂，不进行阻断，余同IR组；IP组：在实验前先将肝中叶和左侧叶的动脉、门静脉和胆管一并阻断缺血5min，然后开放血流5min，反复3次，余同IR组；黄芪组：按10g／kg(按人和动物体重比例计算，为临床剂量的5倍)，用生理盐水稀释到3．0ml，再灌注前5min自尾静脉注入，余同IR组。1．3．2取材和标本收集各组分别在再灌注1、3、6、12h对6只大鼠心腔针刺采血约4ml，注入离心管，常温下静止20min，3000r／min离心30min，提取血清，置

7、于一20℃冰箱保存待测；取左肝固定部位的组织，约1g，迅速放置于一80℃冰箱中保存待测；上述4个时间点每组各取1只大鼠的左肝固定部分2块组织，一块修成1．0cm×1．0cm×0．5cm大小，快速置于10％中性甲醛中固定；另一块再修成几个0．1cm3大小，迅速置于3％戊二醛中固定。1．3．3肝脏生化指标取血清1ml用全自动化生化分析仪检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、LDH水平。采用硫代巴比妥酸比色法测定