食品毒理学实验指导-2010

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1、实验一、动物的一般操作技术1.实验目的和要求*毒理学研究需要用实验动物来进行各种实验，通过对动物的实验观察和分析来研究毒作用，获得毒物的毒性、剂量—反应关系、毒作用机制等方面的资料，因此动物实验是毒理学研究中重要的手段之一。通过本次学习毒理学实验中有关动物实验的基本操作技术，掌握实验动物的选择、动物抓取和分组等技术。2.实验原理做毒理学实验，首先要了解实验动物选择的要求，实验动物分组、实验样品的采集、实验动物处死方法等。3．实验仪器设备：小鼠若干，手套15副，苦味酸酒精饱和液，0.5％中性红或品红溶液，棉签，解剖剪刀10把，感应量为0.1g的天平一台。4．实验内容步骤：(一)

2、健康动物的选择无论选择哪种种属品系的动物进行实验，均要求选择健康的实验动物。健康动物检查时要求达到：外观体形丰满，被毛浓密有光泽、紧贴体表，眼睛明亮，行动迅速，反应灵活，食欲及营养状况良好。选择时重点检查以下几项：l．眼睛明亮，瞳孔双侧等圆，无分泌物。2．耳耳道无分泌物溢出，耳壳无脓疮。3．鼻无喷嚏，无浆性粘液分泌物。4．皮肤无创伤、无脓疮、疥癣、湿疹。5．颈部要求颈项端正，如有歪斜提示可能存在内耳疾患，不应选作实验动物。6．消化道无呕吐、腹泻，粪便成形，肛门附近被毛洁净。7．神经系统无震颤、麻痹。若动物(大鼠、小鼠)出现圆圈动作或提尾倒置呈圆圈摆动，应放弃该动物。8．四肢及

3、尾四肢、趾及尾无红肿及溃疡。(二)实验动物的性别鉴定小鼠主要依据肛门与生殖孔间的距离区分，间距大者为雄鼠，小者为雌性。成年雄鼠卧位可见睾丸，雌性在腹部可见乳头。(三)抓取方法正确地抓取固定动物，是为了在不损害动物健康、不影响观察指标、并防止被动物咬伤的前提下，确保实验顺利进行，小鼠的抓取方法先用右手抓取鼠尾提起，置于鼠笼或实验台上向后拉，在其向前爬行时，用左手拇指和食指抓住小鼠的两耳和颈部皮肤，将鼠体置于左手心中，把后肢拉直，以无名指按住鼠尾，小指按住后腿即可。（四）编号、标记方法1、称重鼠称的感应量在0.1g以下。o2、标记方法染色法：采用染料(苦味酸酒精饱和液)涂擦动物皮

4、毛标记的方法进行编号。用毛笔或棉签蘸取染料涂于动物的不同部位，以苦味酸黄色斑点染料标记来表示不同号码。一般习惯涂在左前腿为1，左腰部为2，左后腿为3，头部为4，背部为5，尾基部为6，右前腿为7，右腰部为8，右后腿为9。如果动物编号超过10，需要10~100号码时，可采用在上述动物的不同部位，再涂染另一种涂料斑点，即表示相应的十位数，即左前腿为10，左腰部为20，以此类推。（五）实验动物的随机分组方法（随机数字表法）为了得到客观的剂量－反应关系，应将一群动物按统计学原则随机分配到各个试验组中。将实验单位随机分成三组　设有动物X只，随机等分成Y组。将动物编号后，按上述方法，从随机

5、数字表抄录X个数字，将各数一律以Y除之，并以余数1、2、3……Y代表各组。动物号码１２３４５随机数目除Y后的余数要使各组的动物数相等，须把原归某组的动物改配到其它组去。可以随机数字表继续按斜角线抄录一个数字，得60，以有多出的一组现有只数除之，余数为几，就可以把第几个移入其它组。5．注意事项：在实验操作过程中，注意安全，以免被小鼠咬伤，防止小鼠丢失。同时要遵守实验操作规程。6．实验结果：掌握实验动物的一般操作、实验样品采集、实验动物处死方法等。7．实验报告要求：实验报告应包含如下内容：原理、仪器和试剂、步骤、原始数据、计算结果。实验二动物染毒途径和方法1．实验目的要求掌握常用

6、的动物染毒途径和方法。2．实验原理：实验动物的一般染毒途径主要是皮下注射、皮内注射、肌内注射、静脉注射、腹腔注射、经口染毒,皮肤染毒和呼吸道染毒。3．实验仪器设备：实验动物：成年、健康小鼠。器材：注射器(0.5，1ml)、消毒棉球、手套、50ml烧杯。试剂：0.9％生理盐水(100ml，灭菌)。4．实验内容步骤：染毒的途径和方法多种多样，可根据实验目的、动物种类和药物剂型等情况确定。1．皮下注射注射时以左手拇指和食指提起皮肤，将连有针头的注射器刺入皮下。注射部位一般在大腿外侧、内侧、背部、耳根部、腹部。2．皮内注射皮内注射时需要将注射的局部脱去被毛，消毒后，用左手拇指和食指按

7、住皮肤使之绷紧，在两指之间，将连有针头的注射器紧贴皮肤表层刺入皮内，然后再向上挑起并再稍刺入，即可注射药物，此时可见皮肤表面鼓起一白色小皮丘。3．肌内注射肌内注射应选用肌肉发达、没有大血管通过的部位，一般多选臀部。注射时垂直刺入肌肉，回抽针栓无回血，即可进行注射。4．静脉注射一般采用尾静脉注射，鼠尾静脉有三根，左右两侧尾静脉比较容易固定，多采用。操作时先将动物固定操作时先将动物固定在鼠筒内或扣在烧杯中，使尾巴露出，尾部用温水浸润或用酒精擦拭，以左手拇指和食指捏住鼠尾两侧，中指从下面托起尾巴，以无名指和小