兔的纤维环细胞和骨髓间充质干细胞共培养的初步研究

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1、东南大学硕士学位论文兔的纤维环细胞和骨髓间充质干细胞共培养的初步研究姓名：张福勇申请学位级别：硕士专业：外科学（骨科）指导教师：吴小涛20080602中文摘要兔的纤维环细胞和骨髓间充质干细胞共培养的初步研究研究生：张福勇导师：吴小涛背景介绍：下腰痛是困扰骨科临床治疗的一大顽症，发病率高，给社会造成了巨大的经济损失。腰椎间盘退变是其主要原因。目前国内外治疗椎间盘退变的措施主要有药物、激素、物理疗法、开放手术及内窥镜和经皮椎间盘镜等微创手术，这些方法虽然能缓解临床症状，但并非是针对椎间盘退变本身的治疗。手术治疗不可避免地会改变椎间盘

2、的正常结构，进而继发脊柱不稳，不但难以预防椎间盘退变，而且还存在促进椎间盘退变的可能。椎间盘退变合理的解决方法就是对退变椎间盘进行生物学修复，以期恢复椎间盘细胞正常的生理状态及细胞外基质的正常合成。组织工程技术的兴起及其在临床不同领域的应用，为椎间盘退变疾病的治疗带来了新的思路。Sakai等将间充质干细胞植入退化的椎间盘内，48周后间充质干细胞增殖明显，II型胶原、蛋白多糖等细胞外基质明显增多，有效的抑制了椎间盘的退变。目前还不清楚植入体内的间充质干细胞是通过何种途径发生效应的⋯。骨髓间充质干细胞(boneIIlfllTOW．d

3、erivedmesenchyrnflsterncells，bMSCs)具有以下特点：取材方便且对机体无害；由它诱导而来的组织在进行移植时不存在组织配型及免疫排斥的问题；它可以向多种组织类型分化，在体外可大量培养扩增；转入外源性基因后不影响其特性晗·3。。因此，bMSCs成为骨组织工程理想的种子细胞，在移植治疗椎间盘退化方面取得了实质性的进展。目前bMSCs与椎间盘细胞及其细胞与细胞外基质问的相互作用机制尚不清楚。椎间盘有外层的纤维环(AF)、内部的髓核及上下终板构成。在椎间盘退变中文摘要防治研究中，修复和维持纤维环的完整性有着重

4、要的意义，纤维环的生物学作用越来越受到人们的重视H闱。本研究拟通过建立bMSCs与纤维环细胞共培养模型初步探讨bMSCs抑制椎间盘退变的部分机制。目的：本研究观察bMSCs与纤维环细胞共培养后是否可以促进细胞的增殖及II型胶原和蛋自多糖的表达，达到阻止和逆转椎间盘退变的目的。方法：分别培养兔的bMSCs与纤维环细胞，将两种细胞按1：l的比例混匀，利用离心管培养技术培养3周后取材，大体观察并行涂片染色；使用荧光染料Hoechst33258检测细胞增殖；利用实时荧光PCR法检测Il型胶原、蛋自多糖基因的表达。结果：在体外培养3周后，

5、共培养组细胞团体积达到最大：涂片染色显示共培养组细胞致密，细胞增殖较对照组明显，实时荧光PCR检测结果显示II型胶原及蛋白多糖基因表达增强。结论：在离心管内三维培养条件下，bMSCs与纤维环细胞共培养能够促进细胞的增殖，增加II型胶原和蛋自多糖基因的表达。关键词：骨髓间充质干细胞；纤维环细胞；生物医学工程；细胞培养；兔II英文摘要PrimarystudyonthecocultureofrabbitbonemesenchymalstemcellsandanulusfibrosuscellsGraduatestudent：ZHANG

6、Fu—yongTutor：1IVUXiao—taoAbstractBackground：Thelifetimeprevalenceoflowbackpainis75％to80％ofthepopulation．Lowbackpainisoneofthemajorcausesofdisabilityana,thus，hasamajorsocioeconomicimpact．Lumbarintervertebraldiscdegeneration(IDD)isamajorcontributortolOWbackpain．Current

7、conventionaltreatmentincludesmedication,steroidinjection，physicaltherapy,andsurgery．Recentprogressinminimallyinvasiveoperationsfordischerniation，suchasendoscopicdisceetomyandpercutaneousdiscectomy，hasbenefitedpatients，buttheseproceduresstilldamagethediscstructure．Thi

8、s，inturn，maycauseful'therdegenerationthateventuallyleadstoinstabilityofthemotionsegmentthatrequiresinterbodyfusiontostabilizethoses