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1、RP-HPLC法测定人血浆中美托洛尔浓度的临床应用【摘要】目的建立快速、简便的RP-HPLC法测定人血浆中美托洛尔浓度。方法采用高效液相色谱法,用HypersilODSC18柱(150mm×4.6mm,5μm)；流动相：乙腈-磷酸氢二铵缓冲液(30:70v/v);柱温:室温;荧光检测，流速1.0ml/min。结果美托洛尔在1.25～160ng/ml浓度范围线性良好(r=0.9989),日内及日间精密度均小于10%,回收率>88%。结论本方法快速、灵敏,可靠，可较好应用于临床血药浓度检测。【关键词】美托洛尔；高效液相色谱法；血药浓度美托洛尔（Metoprolol）属于2A
2、类即无部分激动活性的β1-受体阻断药(心脏选择性β-受体阻断药)。它对β1-受体有选择性阻断作用，无部分激动活性，无膜稳定作用。其阻断β-受体的作用约与普萘洛尔（PP）相等，对β1-受体的选择性稍逊于阿替洛尔。美托洛尔对心脏的作用如减慢心率、抑制心收缩力、降低自律性和延缓房室传导时间等与普萘洛尔、阿替洛尔（AT）相似，其降低运动试验时升高的血压和心率的作用也与PP、AT相似。其对血管和支气管平滑肌的收缩作用较PP为弱，因此对呼吸道的影响也较小，但仍强于AT。美托洛尔也能降低血浆肾素活性，临床应用多年,能有效治疗高血压、心绞痛、心肌梗死、慢性心力衰竭和心律失常等心血管疾病［1，
3、2］。美托洛尔口服吸收迅速完全，吸收率大于90%，但肝脏代谢率达95%，首过效应为25%～60%，故生物利用度（F）仅为40%～75%。食物可增加口服本品的血药浓度达空腹时的1倍。口服血浆浓度高峰时间一般在1.5h，最大作用时间为1～2h。血压的降低与血药浓度不平行，而心率的降低则与血药浓度呈直线关系，由于该药物药理作用与血药浓度存在紧密的相关性，因此，本试验参照相关文献［3，4］，建立了一种快速检测人血浆中美托洛尔的方法，使其更好更广泛适用于临床上美托洛尔血药浓度的检测。1仪器与试药1.1仪器日本岛津LC-10AT泵,RF-10AXL型荧光检测器,7725i型手动进样器,N
4、2000色谱工作站;XW-80A旋涡混匀器；Anke大容量多管离心机，乐百氏纯净水，恒温水浴锅。1.2试药酒石酸美托洛尔（倍他乐克），阿斯利康制药有限公司生产，50mg/片；美托洛尔对照品,含量大于99.8%，购自中国药品生物制品检定所。乙腈，正己烷，异丙醇为色谱纯；其余试剂均为市售分析纯。2方法与结果2.1检测条件色谱条件：流动相：乙腈-0.01mol/L磷酸氢二铵缓冲液(30:70v/v)；流速1.0ml/min，色谱柱HypersilODSC18柱(150mm×4.6mm,5μ3m)；检测波长为275nm/305nm(Ex/Em)；柱温:室温。2.2血浆样品的处理取血浆
5、样品1ml,加入内标液(400ng/L比索洛尔)10μl和1mol/LNaOH溶液200μl旋涡震荡混匀,再加入正己烷（含5%异丙醇）5ml旋涡振荡5min后,4000r/min离心10min,取上清液4ml于50℃水浴挥干,残渣用100μl甲醇溶解,取40μl进样。2.3标准曲线分别取空白血浆1ml,精密加入美托洛尔标准贮备液,使其含美托洛尔分别为1.25、2.5、5、10、20、40、80、160ng/ml血样，按“2.2”项下操作,浓度(C)对峰面积比(R)作线性回归，得：C=0.00204R+0.0013,r=0.9987。最低定量下限为1.25ng/ml。2.4方法
6、专属性在本实验条件下,美托洛尔有较大的响应，并与血浆中内源性杂峰有良好的分离度,不干扰样品峰的测定,基线噪音小,美托洛尔与内标的保留时间分别为3.5、5.8min(见图1),本方法具有较高的专属性,在此条件下所测得的结果能代表美托洛尔浓度。A空白血浆；B空白血浆加入美托洛尔及内标；C患者口服5mg酒石酸美托洛尔1.0h后。1-美托洛尔，2-比索洛尔图1血浆中美托洛尔色谱图2.5精密度与方法回收率取空白血浆1ml,配制含美托洛尔浓度分别为2.5、10、80ng/ml的血浆样品各5份,按“2.2”项下处理后进样分析，每日测定5份，连续测定3天，以每1天内测得的各浓度计算日内RSD
7、，不同日内测定的各浓度计算日间RSD，结果表明日内、日间RSD均<10%,见表1，方法学符合测定要求。表1回收率与精密度试验结果(n=5，x±s)3样品分析及应用分别选择在我科接受酒石酸美托洛尔（倍他乐克）治疗的10例慢性心力衰竭患者,男7例,女3例,体重59.6±7.2kg,年龄62.5±5.3岁,给药前实验室检查肝肾功能均正常,临床用法用量为50mg,每天2次,患者早晨空腹服第1次药后于0.5、1.0、3.0、8.0h抽取患者上肢静脉血,3000转/min离心10min，取上层血浆，按“2.2
