黄芩蛋白的分离与表征

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1、黄芩蛋白的分离与表征中文摘要黄芩作为我国传统中药药材之一，具有广泛的药理作用。黄芩活性成分已被广泛研究，但较少涉及黄芩蛋白。本课题研究对黄芩的蛋白质成分进行了分离，得到了两个电泳纯的蛋白质组分，并分别对其进行了表征。经过硫酸铵分级沉淀和多步离子交换层析后，从黄芩抽提液得到了一个纯的蛋白组分，命名为Pro-1。该蛋白属于糖蛋白，糖含量达14%，单链，分子内部存在一定的键内二硫键，蛋白分子量为62.23kDa，N端前8个氨基酸残基为GSAVGFLY。Pro-1具有凝集素活性，其凝集能力具有选择性。对Pro-1蛋白性质表征的结果显示，其凝集素活性的pH稳定范围大，在pH4.0-10.0

2、范围内，凝集活性不受影响；凝集素活性热稳定性较差，高于60℃，凝集活性降低明显；Pro-1是一种金属依赖型凝集素；Pro-1凝集素对番茄尖孢镰刀菌和水葫芦链格孢菌有明显的抑制作用，但对大肠杆菌及葡萄球菌没有抑制能力；Pro-1能明显促进正常肝细胞L02增殖，但对MDCK的增殖作用不明显；Pro-1蛋白对肝癌细胞HepG2的生长具有明显的抑制作用，最大抑制率达83.43%。在Pro-1的分离过程中，通过离子交换层析，还纯化得到了另一个电泳纯的蛋白质组分，命名为Pro-2。Pro-2为单链蛋白，分子内部有键内二硫键，分子量为33.8kDa，糖含量为16.2%。Pro-2中丝氨酸含量最

3、高，含量为14.6%，酪氨酸和胱氨酸含量都很低。Pro-2蛋白对正常肝细胞L02的生长具有促进作用，对正常狗肾上皮细胞MDCK毒性较大，具有轻微抑制肝癌细胞HepG2作用。关键词：黄芩蛋白，凝集活性，抗真菌，增殖作用，抑制作用67IsolationandcharacterizationoftheScutellariabaicalensisproteinAbstractScutellariabaicalensisherbswithawiderangeofpharmacologicaleffects，areoneoftraditionalChinesemedicineinChina.

4、Theactiveingredientsofscutellariabaicalensishavebeenextensivelystudied,butthescutellariabaicalensisproteinsinvolvedrelativelyfewstudies.Thispaperstudiedtheseparationofscutellariabaicalensisproteinsandobtainedtwo-dimensionalpureproteincomponentsandrespectivelycharacterizedthetwopureproteins.Th

5、roughtheammoniumsulfatefractionationandmorethanonestepionexchangechromatography，apureproteinwasobtainedfromtheextractionofscutellariabaicalensis.TheproteinwasreferredtoasPro-1protein.Theproteinwasakindofglycoproteinwithsugarcontentof14%,single-chainprotein,intrachaindisulfideinmolecularstruct

6、ureandmolecularweightof62.23kDa.EightaminoacidresiduesofPro-1proteinN-terminalwereGSAVGFLY.Pro-1hadlectinactivity,anditsabilitytoagglutinatewasselective.BycharacterizingthePro-1protein,theresultswereshowed.ThelectinproteinPro-1werestableinawiderangeofpHwhichwerefrom4.0to10.0,anditsagglutinati

7、onactivitywasunaffected.ThelectinactivityofPro-1proteinhadpoorthermalstability.Whenthetemperaturewasover60degreescelsius,thehemagglutinatingactivitydecreasedsignificantly.ThePro-1proteinwasametal-dependenttypelectin.Pro-1proteinsignificantlyi