几种无机阳离子对全蝎抗凝活性的影响

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1、几种无机阳离子对全蝎抗凝活性的影响作者：许光明，罗跃，彭延古，雷田香【摘要】目的研究全蝎中无机阳离子对全蝎抗凝活性的影响。方法以凝血酶时间为指标，分别在全蝎提取液中加入相应不同浓度的无机阳离子，考察其对全蝎抗凝活性的影响。结果加入无机阳离子后，明显缩短了全蝎的凝血酶时间（Ｐ＜０．０１）。结论铵离子等无机阳离子对全蝎提取液抗凝活性有明显的影响。【关键词】全蝎；抗凝活性；凝血酶时间；无机阳离子〔Ａｂｓｔｒａｃｔ〕ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｓｔｕｄｙｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｉｎｏｒｇａｎｉｃｉｏｎｓｉｎｓｃｏｒｐｉｎｏｎａｎｔｉｃｏａｇｕｌａｔｉｎｇａｃｔｉ

2、ｏｎｏｆｓｃｏｒｐｉｎ．ＭｅｔｈｏｄｓＴａｋｉｎｇｔｈｅｔｈｒｏｍｂｉｎｔｉｍｅａｓｔｈｅｔａｒｇｅｔｓ，ｔｈｅｉｎｏｒｇａｎｉｃｉｏｎｓｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｗｅｒｅｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙｍｉｘｅｄｉｎｔｈｅｓｃｏｒｐｉｎｅｘｔｒａｃｔｉｏｎａｎｄｔｈｅｉｒｅｆｆｅｃｔｓｏｎａｎｔｉｃｏａｇｕｌａｔｉｎｇａｃｔｉｏｎｏｆｓｃｏｒｐｉｎｗｅｒｅｍｅａｓｕｒｅｄ．ＲｅｓｕｌｔＴｈｅｔｈｒｏｍｂｉｎｔｉｍｅｗａｓｄｉｓｔｉｎｃｔｌｙ8ｓｈｏｒｔｅｎｅｄ（Ｐ＜０．０１）ａｆｔｅｒｔｈｅｉｏｎｓｊｏｉｎｉｎｇｉｎｔｏｔｈｅ

3、ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎTｈｅｉｏｎｓａｒｅｖｅｒｙｅｆｆｅｃｔｉｖｅｔｏｔｈｅａｎｔｉｃｏａｇｕｌａｔｉｎｇａｃｔｉｏｎｏｆｔｈｅｓｃｏｒｐｉｎｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ．〔Ｋｅｙｗｏｒｄｓ〕ｓｃｏｒｐｉｎ;ａｎｔｉｃｏａｇｕｌａｔｉｎｇａｃｔｉｖｅ;ｔｈｒｏｍｂｉｎｔｉｍｅ;ｉｎｏｒｇａｎｉｃｉｏｎｓ全蝎作为传统的中药材，具有熄风止痉、解毒散结、通络止痛等功效。全蝎除了含蝎毒素、三甲胺、牛磺酸、甜菜碱、胆甾醇、卵磷脂、甘油酯、棕榈酸、硬脂酸、铵盐１７种氨基酸等，还含有Ｃａ、Ｍｇ、Ｆｅ、Ｃｕ、Ｚｎ、Ｍｎ、Ｐｂ等元素［１，２］１４１５

4、。实验证明全蝎提取液具有明显的抗凝、抗血栓及促纤溶作用［３，１０］。为进一步研究全蝎抗凝活性的影响因素，本文探索了８种无机阳离子（ＮＨ４＋、Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋、Ｆｅ２＋、Ｃｕ２＋、Ｚｎ２＋、Ｍｎ２＋、Ｐｂ２＋）对全蝎抗凝活性的影响，为临床应用提供依据。１实验材料8１．１仪器Ｓｔａｒｔ－４半自动四通道血凝仪（法国ｓ１１ＡＧＯ公司）；４３００－Ｐｒｏ紫外分光光度计（瑞士安玛西亚公司）；ＨＲ２８３８型匀浆机（菲利普公司）；移液枪。１．２试药全蝎（购自老百姓大药房），凝血酶（上海太阳生物技术有限公司），血浆（自制），生理盐水；ＮＨ４Ｃｌ，ＮａＣｌ，ＣｕＣ

5、ｌ２，ＣａＣｌ２，ＭｇＣｌ２，ＦｅＣｌ２，ＭｎＣｌ２，ＰｂＣｌ２，ＺｎＣｌ２，无水乙醇，均为分析纯。２方法与结果２．１供试品溶液的制备［３，１０］筛去尘渣，称取全蝎５０ｇ，用８倍量的蒸馏水浸泡过夜，用匀浆机以１００００ｒ／ｍｉｎ匀浆，然后煎煮３次（均为８倍量蒸馏水），每次３０ｍｉｎ，过滤，合并滤液，水浴浓缩至含生药１ｇ／ｍＬ，３０００ｒ／ｍｉｎ离心２０ｍｉｎ，分别加无水乙醇至６０％的浓度，４℃放置过夜，３０００ｒ／ｍｉｎ离心２０8ｍｉｎ，取上清液，水浴浓缩至含生药１ｇ／ｍＬ溶液，３０００ｒ／ｍｉｎ离心２０ｍｉｎ，取上清液于４℃低温冰箱中保存备用。

6、２．２凝血酶时间的测定方法［４，５］先取凝血酶用生理盐水稀释至一定的倍数，然后取待测血浆（参比血浆）０．１ｍＬ，３７℃保持２ｍｉｎ，加入３７℃预温凝血酶０．１ｍＬ摇匀，立即开始测定，记录凝固时间，调节凝血酶时间，使空白时间在２０～２２ｓ。２．３ＮＨ４＋Cl对全蝎抗凝活性的影响分别取ＮＨ４Ｃｌ供试液，加至ＮＨ４＋的浓度为０、０．０１４、０．０２８、０．０４２、０．０５６、０．０７０、０．１４０、０．４２０、０．７００、０．９００、１．１２５、１．５４０μｍｏｌ／ｍＬ中。加入血浆，全蝎提取液０．１ｍＬ，凝血酶０．１ｍＬ，测凝血时间。每个浓度重复测５次

7、。结果如表１。通过对照在全蝎提取液中加入ＮＨ４Ｃｌ前后的凝血时间表明，明显缩短了全蝎提取液的抗凝时间（Ｐ＜０．０１）。２．４ＮＨ４＋影响全蝎抗凝活性的确认8由于用ＮＨ４Ｃｌ提供ＮＨ４＋，为了确定其中的Ｃｌ－对全蝎提取液的抗凝活性的是否产生影响，用０．０１、０．１４、１．５４μｍｏｌ／ｍＬ的ＮＨ４Ｃｌ、ＮａＣｌ溶液，加入全蝎提取液中，按“２．３”项下方法加血浆、凝血酶，测凝血时间，每个浓度重复测５次，取平均值。结果发现ＮａＣｌ溶液对全蝎提取液的抗凝活性无影响，ＮＨ４Ｃｌ明显降低了其抗凝作用，缩短了凝血时间。这表明是ＮＨ４＋而不是Ｃｌ－对全蝎抗凝时间

8、有影响（Ｐ＜０．０１），降低了全蝎抗凝活性。如图１。２．５ＮＨ４＋自身抗凝作用测定为了确定ＮＨ４＋本身是否对血浆有抗凝活性，加入ＮＨ４＋