实时荧光定量pcr检测人il9 mrna方法的建立及应用

《实时荧光定量pcr检测人il9 mrna方法的建立及应用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、实时荧光定量PCR检测人IL9mRNA方法的建立及应用作者：杨先知史烨柳迎昭陈建国田洁　刘艳刘青玲苏兆亮仝佳马斌马洁邵启祥许化溪王胜军【摘要】目的：建立检测人白介素9(interleukin9，IL9)mRNA的SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR(realtimefluorescencequantitativePCR,qRTPCR)方法。方法：分离人外周血单个核细胞(peripheralbloodmononuclearcells,PBMC)，经PMA和离子霉素刺激活化后提取总RNA并逆转录成cDNA。扩增产物与pMD18T载体连接构建质粒标准品

2、。采用qRTPCR方法检测IL9mRNA的表达水平。评价该方法的线性及特异性，应用该方法检测Graves病患者PBMC中IL9mRNA表达水平。结果：建立了人IL9的SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法。该法的标准曲线相关系数r2为0.995～0.998，熔解曲线分析产物为单峰。Graves病患者PBMC中IL9mRNA的相对表达水平明显高于健康对照组(P<0.01)。结论：建立的检测人IL9mRNA的SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR方法灵敏、特异性好，为进一步临床应用提供了实验基础。【关键词】白细胞介素9;实时荧光定量PCR

3、;SYBRGreenⅠ11　　[Abstract]Objective:ToestablishaSYBRGreenⅠbasedrealtimefluorescencequantitativePCR(qRTPCR)methodfordetectionhumaninterleukin9(IL9)mRNAexpression.Method:ThespecificprimersweredesignedaccordingtotheconservedsequenceofhumanIL9gene.TotalRNAswereextractedfromhumanperip

4、heralbloodmononuclearcells(PBMC)whichwerestimulatedbyPMAandionomycin,thentheRNAsweretranscribedreverselyintocDNAs.Theplasmidstandardswereconstructed.Thesensitivityandspecificityofthemethodwereevaluated.TherelativeexpressionlevelsofhumanIL9mRNAinPBMCsfrompatientswithGraves′disease(GD

5、)andhealthycontrolsweredetectedbythismethod.Results:Thecoefficientofcorrelationofthestandardcurveofthismethodwas0.995-0.998,meltingcurveanalysisshowedsinglepeak.TherelativeexpressionlevelsofhumanIL9mRNAinGDgroupwerehigherthanthatinhealthycontrolgroup(P<0.01).Conclusion:Themethodt

6、odetectIL9bySYBRGreenⅠbasedqRTPCRwasgoodinsensitivity,specificityandlinearfunction.ItcanbeusedasastandardmethodofqRTPCRfordetectionofhumanIL9expression.　　[Keywords]interleukin9;realtimefluorescence11quantitativePCR;SYBRGreenⅠ　　早先认为IL9是由Th2细胞分泌的一种细胞因子，在抗寄生虫感染及过敏性哮喘中发挥重要作用。近期研究发

7、现有一种新的CD4+T细胞亚群，主要分泌IL9及IL10，称之为“Th9细胞”,在炎症反应及自身免疫性疾病中发挥重要的作用[1-3]。我们建立了一种检测人IL9表达的实时荧光定量PCR(realtimefluorescencequantitativePCR,qRTPCR)方法，并应用于Graves病患者外周血单个核细胞(peripheralbloodmononuclearcell,PBMC)中人IL9mRNA的检测，为进一步研究IL9在临床中的应用提供了实验手段。　　1材料和方法　　1.1材料　　1.1.1研究对象Graves病患者组22例(男5例

8、，女17例)，平均年龄(