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1、丙型肝炎临床检验技术发展现状与展望【关键词】HCV抗原检测核心抗原核酸检测技术(NAT)同时检测丙型肝炎是由丙型肝炎病毒(HCV)感染引起的一种重要的世界性传染病[1],这种病毒主要经由血液传播，也可能存在其他传播途径如母婴传播、性传播和家庭内接触传播。约有近半数的HCV感染传播途径不明确。丙型肝炎的流行呈全球性，是欧美及日本等国家终末期肝病的最主要原因。根据WHO统计，全球HCV的感染率约为3％，估计约2亿人感染了HCV，每年新发丙型肝炎病例约有3.5万例。目前尚无治疗丙型肝炎的疫苗，也没有有效的治疗方法。因此防控丙型肝炎传染源及阻断传播途径最为有效的手段就是早期准
2、确诊断并及时发现HCV感染者。从传染源和传播途径两方面控制丙型肝炎[2]。正因为如此世界各国都在不遗余力地研究诊断丙型肝炎的新技术。自1989年建立了丙肝病毒抗-HCV检测方法以来,随着医学检测技术和仪器的不断发展，丙型肝炎的检测技术一直处于不断发展中。到目前为止，丙型肝炎检测技术主要有抗-HCV检测、HCV-RNA核酸扩增检测、HCV核心抗原的检测以及同时检测抗-HCV和HCV核心抗原4种类型。本文将对丙型肝炎临床检验技术的发展与展望做一综述，现报道如下。1抗-HCV的检测最早出现的HCV检测技术是抗-HCV的检测。由于HCV在病人外周血液中的含量及病毒抗原的含量很
3、低，这就使得用常规方法难以直接检测，经过十几年的不断改进和发展，其检测方法又演变出多种,如:双抗原夹心ELISA、间接酶联免疫吸附实验(间接8ELISA)、重组免疫印迹法(RIBA)、蛋白芯片检测法以及免疫层析法。在这些方法之中，重组免疫印迹法(RIBA)是抗体检测的金标准，蛋白芯片检测法主要用于抗-HCV的分型。而ELISA由于其操作简单，检测设备廉价，因此成为应用最广的抗体检测技术。根据出现时间的先后以及使用抗原的不同,抗-HCV检测技术可分成三代。第一代抗-HCVIgG试剂盒所用的抗原来自病毒基因组非结构区(C100)，它的使用使HCV的输血感染率下降了80%以
4、上。但其缺陷是:灵敏度较低,抗体检出时间较晚,敏感性也较高，达到80％～90％，但假阳性较高。第二代试剂除了包被C100抗原外又加入了HCV核心区多肽C22—3和非结构区抗原C33C。抗-C22-3和抗-C33C感染后出现较早,敏感性和特异性明显提高，感染后8～12周即可检测。且对HCV的特异性较好,二者联合应用可进一步提高检出率。第三代HCV抗体ELISA试剂中采用了重组的NSS多肽，核心区抗原比例相对下降,而相应地增加了非结构区的NSS区C33C抗原的比例,添加了NSS区抗原使其敏感性和特异性得到进一步改善。上述三代抗-HCV检测方法多采用间接ELISA,虽然也有
5、过双抗原夹心直接检测抗-HCV的报道[3],但由于HCV抗原存在不稳定性,因此至今仍无商品化的试剂盒。目前我国市售的抗-HCV试剂盒普遍是采用间接法的第三代抗-HCV8ELISA试剂盒和胶体金试剂盒,其特异性可以达到92%～100%。但由于各厂家使用的HCV基因重组抗原的质量和各抗原片段包被比例有所不同，从而使各厂家试剂的灵敏度和特异性存在一定的差异，导致抗一HCV检测结果的不一致，产生漏检和假阳性等[4]，未能解决在正常ALT者和健康献血者存在的假阳性问题。加上少部分免疫功能不正常的HCV感染者，则不能检出抗一HCV。另外，由于“窗口期”的存在，仍有一定的漏检率[5
6、]。目前抗-HCV的检测方法仍有改进的潜力，随着对HCV的研究不断深入,更多的HCV蛋白会被发现,其中新型核心蛋白和外膜蛋白被认为能有效提高抗-HCV的灵敏度,但其对抗体的检出率依赖于抗原的获得方法,可能与抗原的构象表位有关[6,7]。2HCV-RNA核酸扩增检测技术(Nucleic-acidAmplificationTechnologyNAT)从外周血中检出HCVRNA是HCV复制活跃的可靠指标,在感染2个星期内的血清中可检测到HCVRNA,在感染自然恢复前血清中HCVRNA将达到一个高峰[8],目前NAT检测被国内外部分机构作为HCV感染的确认方法。但HCVRNA
7、在达到峰值或重新出现前数天或数周内偶尔也可能检测不到[9]。同时HCVRNA还受进食的影响,易与血中脂质及脂蛋白结合,降低检出率[10]。因此在一定程度上影响了NAT检测方法的完美。另外由于NAT检测技术本身在技术和设备上要求较高,且耗时、实验步骤较多(其中任何步骤出现问题均影响其检出),因此该方法也容易因污染而出现假阳性,难以在常规工作或基层实验室推广,限制了其应用的普遍性。NAT检测技术同为检测HCVRNA,但不同的厂商发展出不同的方法和技术,其中PCR技术发展得最为迅速,也得到了最广泛的应用,最早的是8RT-PCR,然后是套式PCR,现在是实时
