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1、温度对颗粒脂肪和ASCs活性及体外处理方法对移植后脂肪成活的影响暨南大学硕士学位论文摘要研究背景:脂肪源性干细胞(Adipose-derivedstromalvascularfractioncells/stemcells,ASCs),是存在于脂肪组织中的间充质干细胞,具有自我更新及多向分化潜能等干细胞的生物学特性。目前已成为再生医学研究的新热点,特别是关于脂肪源性干细胞辅助的自体脂肪移植,将传统的颗粒脂肪移植提高到了一个新的层面,展现出了更加广阔的应用前景。自体脂肪组织因其较好的生物相容性,获取简便,已作为临床上常用的软组织填充材料
2、广泛应用于整形修复和美容为目的的软组织增大。如何提高移植脂肪组织的成活率是目前最为关注和需要解决的问题。脂肪组织供体及受体的选择、脂肪组织的获取、脂肪组织的处理、保存环境及时间对脂肪组织的影响、注射脂肪组织的方法及注射量等因素均可影响脂肪组织移植的成活率。本实验通过不同保存温度及时间对体外颗粒脂肪组织的活性及其脂肪源性干细胞提取、增殖能力的差异及体外颗粒脂肪组织的不同处理方式对体外颗粒脂肪组织移植效果的差异,探讨不同保存温度、时间及体外处理方法对移植脂肪组织的影响,从而优化临床脂肪源性干细胞辅助的自体脂肪组织移植技术,使得该技术更加
3、简便、安全、有效。目的:1、分离和培养人脂肪来源干细胞(ASCs),对获得ASCs进行鉴定。2、观察不同保存温度及时间对体外颗粒脂肪组织的活性及其脂肪源性干细胞提取效率、增殖能力的影响。3、观察颗粒脂肪组织在体外不同处理方式对其移植后成活情况的影响。材料及方法:1)人脂肪组织取材,I型胶原酶酶消化法分离培养脂肪源性干细胞。观察细胞形态。选取P1代脂肪源性干细胞进行流式细胞仪(Fluorescence-activatedcellsorting,FACSCD44CD45CD59CD29HLA-DR)细胞表型检测,选取、、、、进暨南大学硕
4、士学位论文行检测。成脂和成骨诱导液连续培养ASCs3周后,分别进行油红染色和茜红素染色,观察细胞多向分化能力。2)获取健康女性抽脂所得体外颗粒脂肪组织,将体外颗粒脂肪组织按保存方式及时间进行分组保存,对每组颗粒脂肪进行组织形态学、油脂比值、G3PDH活性、脂肪源性干细胞提取效率及增殖能力进行研究。3)获取健康女性抽脂所得体外颗粒脂肪组织,将体外颗粒脂肪组织按不同纯化方式(洗涤离心法、单纯离心法、洗涤静置法、单纯静置法、洗涤静置离心法及不进行纯化)进行分组,将每组处理好的体外颗粒脂肪称重后分别注入裸鼠皮下,饲养4周后取材,对其重量、形
5、态学情况进行研究分析。结果:1、利用胶原酶消化法,可以获得大量的人脂肪源性干细胞。体外培养人脂肪源性干细胞成梭形细胞生长。在P1细胞中有大量CD44、CD59、CD29所标记的细胞,CD45、HLA-DR所标记细胞含量极少。成脂和成骨诱导液连续培养ASCs3周后,分别进行油红染色和茜红素染色可见呈橙红色颗粒状脂滴及红色钙化结节。2、4℃保存体外颗粒脂肪组织24小时内可以有效的保护其活力,室温条件下保存体外颗粒脂肪组织会使其活力下降较快。体外颗粒脂肪组织提取干细胞的效率及其增殖能力受保存温度及时间影响,室温条件下保存超过1小时的体外颗
6、粒脂肪组织,其脂肪源性干细胞的提取效率及增殖能力均明显下降。3、不同体外脂肪组织处理方法对移植后成活脂肪组织重量及形态学无明显影响。结论:1、人脂肪组织中可以获得大量的具有多分化能力的贴壁细胞,并且表达CD44、CD59、CD292、24小时内,4℃保存可以有效的保证体外颗粒脂肪组织的活性及其提取脂肪源性干细胞的效率、增殖能力,因此,脂肪组织获取过程中低温保存有重要意义。3、单纯静置法是有效的体外脂肪组织的处理方法,具有操作简便,减少污染的优点,且不影响移植效果。暨南大学硕士学位论文关键词:脂肪源性干细胞脂肪组织活性提取效率增殖能力
7、暨南大学硕士学位论文AbstractBackground:Adipose-derivedstromalvascularfractioncells/stemcellsASCsaremesenchymalstemcellsexistinginadiposetissues,whicharecharacterizedbyself-renewalandmultipotentialdifferentiation.Theyhavebecomeanewhotpotinstudiesontheregenerativemedicine,especial
8、lyontheASCs-assistedautologousfatgrafting,whichgivesanewdimensiontothetraditionalgrainyfatgraftingandshowsmorepotenti
