实验一abo及rh血型鉴定2013.3

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1、实验一ABO血型 鉴定和Rh血型鉴定临床检验诊断学实验室实 验 内 容一、5%红细胞悬液的配制 二、ABO血型鉴定(试管法、纸片法)三、Rh血型鉴定?一、5%红细胞悬液的配制原理:使用一定量的稀释液(生理盐水)稀释压积红细胞,遵循抗原抗体结合的量比关系,获出最佳结果。器材:小试管(玻璃及塑料皆可)、加样枪、试管架、离心机、记号笔、显微镜。试剂:生理盐水。标本:抗凝或非抗凝静脉血。操 作1、全血2ml1000g离心5min,吸取分离上清至另一干净试管(备用);2、压积加生理盐水约2~3ml,充分摇匀或吸管

2、轻轻吹打混匀,再次离心去掉上清液;3、重复离心(1000g,60s)洗涤红细胞3次,去掉上清液制备压积红细胞;4、取1滴压积红细胞于1支干净的小试管中,在其中加入19滴生理盐水,用小吸管轻轻吹打混匀,就是5%的红细胞悬液。目的:掌握ABO正反定型的原理、方法。原理:红细胞凝集试验,通过正、反定型鉴定ABO血型。正定型:用已知血型特异性抗体(抗-A、抗-B)来测定红细胞上有无相应的抗原;反定型:用已知血型试剂红细胞测定血清中有无相应的抗体。二、ABO鉴定器材:记号笔、小玻璃试管、滴管、试管架、离心机、鉴定

3、纸板、显微镜。试剂:1.ABO血型抗体:抗A、抗B(-A、-B);2.试剂红细胞:3%~5%Ac、Bc及Oc。3.生理盐水。标本:抗凝或非抗凝静脉血。操作(试管法)(1)标记试管:正定型:取洁净小试管2支,分别标明-A、-B;反定型:取3支小试管,标记Ac、Bc、Oc。(2)配5%悬浮红细胞:取静脉血2滴于小试管中,加2ml生理盐水,混匀,1000g离心60s,弃上清;重复3次。取管底1滴压积加19滴生理盐水,即为5%悬红。(3)加样:正定型管中分别加入1滴试剂和1滴悬红,反定型管中分别加入2滴血清和1

4、滴试剂红细胞。(4)离心:1000g离心15秒。(5)结果:轻摇试管,观察有无凝集或溶血现象。4+红细胞凝集成一大块,血清清晰透明。3+红细胞凝集成大小块,血清清晰。2+红细胞凝块分散成许多小块,血清清晰。l+肉眼可见大颗粒,周围有较多游离红细胞。±镜下可见数个红细胞凝集在一起,周围有很多游离红细胞。mf混合凝集外观(mixedfield)指镜下可见少数红细胞凝集,而极大多数红细胞仍呈分散分布。-表示阴性,镜下未见凝集,红细胞均匀分布。红细胞凝集强度判断标准试管法结果判定表lABO血型正反定型结果试剂血

5、清+受检红细胞受检血清+试剂红细胞(正定型)(反定型)-A-B受检血型AcBcOc+-A-+--+B+----O++-++AB---判断标准操作:玻片法(鉴定纸板)(1)洁净玻片(鉴定纸板)一张。标-A、-B,分别用滴管滴加抗-A、抗-B试剂1滴,再加受检者10%红细胞悬液l滴,混匀。(2)另取洁净玻片(或鉴定纸板)一张。标Ac、Bc、Oc,各加受检血清2滴,再分别滴加Ac、Bc、Oc悬红1滴。(3)室温轻转动玻片(或鉴定纸板),使血清与细胞充分混匀,约2min肉眼观察凝集(溶血)反应。玻片试验时可用低

6、倍镜观察结果。正定型反定型注意事项1.试剂2.悬红3.蛋白4.溶血5.冷抗体6.老年、儿童7.污染目的掌握Rh血型鉴定的原理、方法。原理Rh血型系统,包括四十几个抗原,通常使用相应的抗C、抗c、抗D、抗E、抗e五种Rh分型血清来检查红细胞抗原。在临床输血中一般只做D抗原的鉴定,被检红细胞和抗D血清凝集者为Rh阳性,不凝集者为Rh阴性。三、Rh血型鉴定器材小试管、滴管、试管架、记号笔、鉴定纸板、显微镜、离心机。试剂1.Rh抗血清:常用的为IgM抗抗D(其他为抗C、抗c、抗E、抗e)。2.己知Rh阳性和阴性

7、的5%红细胞悬液各1份3.生理盐水。标本静脉血。操作(盐水试管测试法)1.取单克隆抗-D(IgM)-C、-c、-E、-e试剂各1滴到5支试管中。2.每管各加1滴3%~5%待检红细胞悬液。3.充分混匀,以1000g离心15秒。4.观察结果:轻摇散开试管底部的细胞扣,用肉眼观看凝集。5.判定结果注意事项1.用抗D血清进行Rh血型鉴别时,结果为阴性,不能直接报告Rh阴性,需进一步检测弱D型还是部分D型。2.Rh血型鉴定应严格控制温度与时间,因Rh抗原、抗体凝集反应块比较脆弱,观察反应结果时,应轻轻摇动试管,不

8、可用力振摇。3.Rh血型系统的抗体多为后天免疫刺激产生,不需要做反定型。作业简述导致ABO血型鉴定出现正反定型不一致的常见原因。

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