高效液相色谱分析法

《高效液相色谱分析法》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、高效液相色谱分析法HighPerformanceLiquidChromatography§3-1概述3-1.1HPLC的特点自俄国植物学家Tsweet提出经典液相色谱法后，色谱分析法取得了迅速的发展，而且，在相当长的一段时间内，气相色谱法占居着色谱分离与分析的“统治地位”。但气相色谱法对高沸点有机物的分析有一定的局限性，因而人们又重新认识到液相色谱可弥补这一点。而经典液相色谱柱的柱效太低(n=2～50)始终是制约液相色谱发展的“瓶颈”因素，所以，20世纪60年代末，伴随着色谱理论的不断完善与发展，色谱工作者经过大量的科学实验发现：采用“微粒固

2、定相”是提高液相柱色谱柱效的重要途径之一。因此，随着“高效微粒固定相”的研制成功，液相色谱仪制造商在借鉴气相色谱仪研制经验的基础上,又成功地制造了“高压输液泵”和“高灵敏度检测器”等组成部件，使液相色谱成为以“三高”(高效微粒固定相、高压输液泵和高灵敏度检测器)为特征的HPLC法。HPLC与经典液相柱色谱法的分析原理虽无本质差别，但经三十多年的发展，HPLC既可以在分析速度、分离效能、检测器灵敏度和操作的自动化程度等方面与气相色谱分析法相媲美，同时又保持了经典液相色谱对样品适用范围广、可供选择的流动相种类多等优点，因此，广泛应用于生物工程、制

3、药工业、食品工业、环境监测、石油化工等领域。一、与经典液相柱色谱法比较见表2-1。二、与气相柱色谱法比较HPLC与GC相比较，主要有以下几点优势：⒈GC的分析对象仅限于蒸汽压低、沸点低的样品(仅占有机物总数的20%)，不适于分析高沸点有机物、高分子化合物、热稳定性差的有机物及生物活性物质。而HPLC不受此限制，能对80%的有机物进行分离与分析。⒉GC流动相为惰性气体，不能与待测组分发生作用。HPLCTable2-1经典液相色谱法HPLC法固定相特征粗粒多孔全多孔微粒粒径75～600μm5～50μm色谱柱柱长材料柱内径10～200cm玻璃10～

4、50mm10～25cm不锈钢等金属材料2～10(常为4～5mm)流动相输入方式溶质动力学特征入口压力/MPa柱效/n(块/m)分析时间/h进样量/g仅靠自身重力传质、扩散速度慢0.001～0.12～501～201～10高压输液泵传质、扩散速度快2～202×103～5×1040.05～1.010-6～10-2流动相选择余地大(极性、非极性、弱极性、离子型等溶剂)，可与待测组分发生作用，而且通过改变流动相的组成，可改善分离的选择性(相当于增加了一个控制和改进分离条件的参数)。⒊GC通常在高温下进行，HPLC可以室温下进行分离与分析。⒋非破坏性检测

5、器在HPLC中的使用，可使样品回收(特别是少量珍贵样品)或样品的纯化制备成为可能(大多数情况下，样品在分析后，可移去流动相而留下纯的组分)。三、HPLC特点⒈分离效能高由于高效微粒固定相的使用，使理论塔板数可达到103～104块/m，远远高于GC的103左右(填充柱)。⒉选择性高因为流动相可与样品组分发生相互作用，所以，通过改变流动相的组成，可以达到控制和改善分离过程选择性的目的。因此，HPLC不仅可以分析不同类型的有机物及其同分异构体，而且已在合成药物和生化药物的生产与控制分析中发挥了重要作用。⒊检测灵敏度高HPLC中应用的检测器大多数都有

6、较高的灵敏度。如：①.紫外(UV-Ultraviolet)检测器最低检出量达10-9g～10-10g;②.荧光(Fluorescence)检测器最低检出量达10-12～10-13g③.电化学(ElectroChemical)检测器最低检出量达10-9～10-12g(安培检测器)。⒋分析速度快高压输液泵的使用，使HPLC分析一个样品仅需几分钟至几十分钟。3-1.2HPLC的分类HPLC按照样品组分在固定相和流动相分离过程的物理化学原理分类，可分为：⒈吸附色谱(AdsorptionChromatography)固定相是固体吸附剂，流动相为不同极性

7、的溶剂。⒉分配色谱(PartitionChromatography)固定相是（载体＋固定液），流动相为不同极性溶剂。但根据固定相和流动相相对极性的差别，又可分为：⑴.正相分配色谱(NormalPhaseChromatography),固定相的极性大于流动相的极性。⑵.反相分配色谱(ReversedPhaseChromatography),固定相的极性小于流动相的极性。⒊离子色谱(IonChromatography)固定相：高效微粒离子交换剂。流动相：具有pH值的缓冲溶液。分离原理：依据离子型化合物中各离子组分与离子交换剂上表面电荷基团进行可逆

8、交换能力的差别而实现分离。⒋体积(空间)排阻色谱(SizeExclusionChromatography)固定相：具有化学惰性的多孔性凝胶。流动相：⑴.以水作流动相