病毒感染的检查方法与防治原则

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1、第25章病毒感染的检查方法与防治原则讲授陈利玉内容第一节病毒感染的诊断(检查方法）第二节病毒感染的特异性预防(自学）第三节病毒感染的治疗（自学）第一节病毒感染的诊断（Diagnosisofviralinfection）◙标本采集与送检原则◙病毒感染的检查方法一、标本采集与送检原则◙按疾病种类与病程采取不同标本◙在发病早期与用药之前采取标本◙无菌操作，有菌标本用“双抗”（青、链霉素）或“三抗”（青、链霉素+两性霉素B）处理◙冷藏速送，病变组织用50％甘油保存◙血清学检测：IgM—单份血清,IgG—双份血清二、检

2、查方法◙病毒的形态学检查◙病毒的血清学检查◙病毒的分子生物学检查◙病毒的分离培养与鉴定1.病毒形态学检查电子显微镜：可观察各种病毒的形态但设备贵、操作复杂，应用受限光学显微镜：可观察大病毒（痘病毒）和包涵体对一般病毒检测意义不大呼肠病毒感染回肠上皮细胞电镜照片ElectronmicrographsInclusionbodyCytomegaliccellthatcontainsadense,"owl'seye,"acidophilicintranuclearinclusionbodyNegrybody2.病毒血

3、清学检查◙已知抗原—测抗体（诊断）◙已知抗体—测抗原（鉴定病毒属、种、型、亚型）(1)中和试验(Neutralizationtest)(2)血凝抑制试验(Hemagglutinationinhibitiontest)(3)免疫标记法(FIA、EIA、RIA)⑷蛋白印迹(Westernblot)2.病毒血清学检查方法：ImmunofluorescensetestImmunofluorescensetestPositiveimmunofluorescencetestforrabiesvirusantigen.(S

4、ource:CDC)HEL细胞中CMVIE1蛋白的表达Enzymeimmunoassay(EIA)ELISAColouredwellsindicatereactivityAIDS的确诊试验Westernblot3.病毒分子生物学检查可用于检测常规培养系统不能培养的病毒可用于检测少量标本或含少量病毒的标本可用于抗体产生前或不能产生抗体的免疫缺陷患者检测可对病毒进行定量检测，有助于疗效监测可对病毒进行基因分型灵敏度高、特异性好、快速、简捷优点：3.病毒分子生物学检查核酸电泳(nucleicacide

5、lectrophoresis)核酸杂交(nucleicacidhybridization)核酸扩增(PCR）基因芯片(genechip)基因测序(genesequence)方法：4.病毒的分离培养与鉴定:◙病毒的分离培养◙病毒的鉴定◙病毒数量及感染性测定病毒的分离培养方法：动物接种鸡胚培养细胞培养:⑴动物接种(animalinoculation)动物：鼠、兔、猴、黑猩猩等优点：结果易观察，可建立动物模型缺点：有饲养条件要求，费用高、动物体内常带有潜伏病毒。目前已很少应用。⑵鸡胚培养(embryo

6、natedeggculture)受精卵孵育10-12天鸡胚接种病毒孵育2-7天收获相应的材料进行鉴定鸡胚接种部位：尿囊腔接种绒毛尿囊膜接种卵黄囊接种羊膜腔接种优点：易管理不带微生物成本较低缺点：操作程序复杂目前用鸡胚培养的病毒主要是流感病毒⑵鸡胚培养(embryonatedeggculture)(3)细胞培养(cellculture)根据细胞生长的方式分:单层细胞培养（monolayercellculture）悬浮细胞培养（suspendedcellculture）根据细胞来源、染色体特征及传代次数分:

7、原代培养细胞二倍体细胞株传代细胞系或株(3)细胞培养(cellculture)①原代培养细胞（primaryculturalcells)组织组织块分散的单个细胞单层细胞剪碎蛋白酶(原代细胞)单层细胞(次代细胞)传代培养培养基①原代培养细胞（primaryculturalcells)epithelialcells特点:◙对多种病毒敏感◙生长能力有限,获取成本高◙可携带潜伏病毒应用:◙病毒分离与鉴定◙病毒学实验研究◙不能用于制备疫苗①原代培养细胞（primaryculturalcells)体外分裂50~100

8、代仍保持二倍染色体数目的单型细胞特点:◙对多种病毒敏感◙不带异种蛋白(人源性)◙不带病毒,无致瘤潜能应用:◙病毒分离与鉴定◙病毒学实验研究◙制备疫苗②二倍体细胞株(diploidcellstrain)fibroblasticcells③传代细胞系(continuouscellline)特点:◙对多种病毒敏感性高◙繁殖能力强,传代时间长◙有致癌危险(来源于癌细胞或突变的二倍体细胞株)应用:◙病毒分离与