人子宫内膜细胞原代体外培养方法

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1、人子宫内膜细胞原代体外培养方法首席医学网    2007年12月20日22:32:33Thursday  45作者：秦莉花，秦明春，李晟，王若光，刘小丽，李春梅，吴长虹    作者单位：（１．湖南中医药大学２００４级研究生班，湖南长沙４１０００７；２．湖南中医药大学，湖南长沙４１０００７）〔摘要〕目的改良人子宫内膜细胞原代体外培养方法的建立，并对其进行特征鉴定。方法将选择的子宫内膜组织机械法分离，复合酶消化，传代自然增殖法纯化细胞，进行单层培养。通过倒置显微镜观察其大体形态，ＨＥ染色观察其胞核情况，免疫细胞化学染色法对间质细胞（ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌｓｔｒｏｍａｌｃｅｌｌ

2、，ＥＳＣ）及上皮细胞（ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌｇｌａｎｄｕｌａｒｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌ，ＥＥＣ）进行鉴定。结果培养的子宫内膜细胞均有ＥＳＣ和ＥＥＣ两种形态细胞。ＥＥＣ和Ｅ 加入收藏夹 向本刊在线投稿【关键词】 原代人子宫内膜细胞；免疫细胞化学；体外细胞培养   ＥｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔｏｆＭｅｔｈｏｄｆｏｒＨｕｍａｎＥｎｄｏｍｅｔｒｉａｌＣｅｌｌ   ＣｕｌｔｕｒｅｉｎＶｉｔｒｏ   ＱＩＮＬｉ－ｈｕａ，ＱＩＮＭｉｎｇ－ｃｈｕｎ，ＬＩＳｈｅｎｇ，ＷＡＮＧＲｕｏ－ｇｕａｎｇ，ＬＩＵＸｉａｏ－ｌｉ，ＬＩＣｈｕｎ－ｍｅｉ，ＷＵＣｈａｎｇ－ｈｏｎｇ   （ＴＣＭＵｎｉｖｅｒ

3、ｓｉｔｙｏｆＨｕｎａｎ，Ｃｈａｎｇｓｈａ，Ｈｕｎａｎ４１０００７，Ｃｈｉａｎ）   〔Ａｂｓｔｒａｃｔ〕ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｉｍｐｒｏｖｅｔｈｅｍｅｔｈｏｄｆｏｒｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌｃｅｌｌｃｕｌｔｕｒｅｉｎｖｉｔｒｏａｎｄｉｄｅｎｔｉｆicationofthecells．ＭｅｔｈｏｄｓＨｕｍａｎｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌｔｉｓｓｕｅｓｗｅｒｅｓｅｐａｒａｔｅｄｍｅｃｈａｎｉｃａｌｌｙ，ｄｉｇｅｓｔｅｄｂｙｃｏｍｐｌｅｘｅｎｚｙｍｅ，ｐｕｒｉｆｉｅｄｂｙｐａｓｓａｇｅａｎｄｍｏｎｏｌａｙｅｒｃｕｌｔｕｒｅｄ．Ｔｈｅｃｅｌｌｕｌａｒｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙｗａｓｏｂｓｅｒｖｅｄ

4、ｂｙｉｎｖｅｒｔｅｄｐｈａｓｅｃｏｎｔｒａｓｔｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ，ｔｈｅｎｕｃｌｅｕｓａｎｄｃｙｔｏｐｌａｓｍｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄｂｙｓｔａｉｎｉｎｇｏｆｈａｅｍａｔｏｘｙｌｉｎａｎｄｅｏｓｉｎ（ＨＥ）；Ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌｓｔｒｏｍａｌｃｅｌｌａｎｄｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌｇｌａｎｄｕｌａｒｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｗｅｒｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｂｙｔｈｅｍｅｔｈｏｄｏｆｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙｏｆｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ（ＣＫ１８）ａｎｄｖｉｍｅｎｔｉｎ（Ｖｉｍ）．ＲｕｓｕｌｔｓＢｏｔｈｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌｓｔｒｏｍａｌｃｅｌｌ（ＥＳＣ）ａｎｄｅｎ

5、ｄｏｍｅｔｒｉａｌｇｌａｎｄｕｌａｒｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌ（ＥＥＣ）ｗｅｒｅｅｘｉｓｔｅｄｉｎｔｈｅｃｕｌｔｕｒｅ；ＥＥＣａｎｄＥＳＣｓｔａｉｎｅｄｂｙＣＫ１８ａｎｄＶｉｍＭｃＡｂｉｎｔｈｅｂｒｏｗｎ－ｙｅｌｌｏｗｗｅｒｅｐｏｓｉｔｉｖｅｃｅｌｌｓ．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＴｈｅｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌｃｅｌｌｉｓｃｕｌｔｕｒｅｄｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙｉｎｖｉｔｒｏａｎｄｔｈｅｍｅｔｈｏｄｉｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｗｉｔｈｈｉｇｈｓｕｒｖｉｖａｌｒａｔｅａｎｄｌｏｗｃｏｓｔ，ｗｈｉｃｈｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌｆｕｎｃｔｉｏｎ

6、ａｎｄａｄｊｕｓｔｉｎｃｅｌｌａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｌｅｖｅｌ．〔Ｋｅｙｗｏｒｄｓ〕ｈｕｍａｎｅｎｄｏｍｅｔｉａｌｃｅｌｌ；ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ；ｃｅｌｌｃｕｌｔｕｒｅｉｎｖｉｔｒｏ   子宫内膜作为性激素作用的靶器官，通过子宫内膜细胞进行体外培养，观察子宫内膜对激素、各类药物细胞因子的作用，在妇产科疾病的研究中占有重要的地位。但对子宫内膜腺上皮细胞（ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌｇｌａｎｄｕｌａｒｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌ，ＥＥＣ）及间质细胞（ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌｓｔｒｏｍａｌｃｅｌｌ，ＥＳＣ）的培养，各家报道的方法不一，方法简单者细胞纯度不高，方法复杂

7、者经多次过滤等操作增加了污染的可能性。本研究旨在探索建立一种较简便、纯度高的子宫内膜细胞体外培养方法，为从细胞和分子水平方面研究子宫内膜的各种功能及干预调节奠定基础。现将实验方法及结果报道如下。   １材料与方法   １．１ 材料   １．１．１ 子宫内膜组织标本的获取 标本来自于湘雅附三医院和省妇幼保健院不孕症诊刮术，或子宫肌瘤子宫全切除的患者，均无其它内分泌疾病，年龄２５～３５岁，月经周期规则，手术前３个月内未服用过激素类药物，如避孕药、氟灭酸等影响内分泌的药物，术中获取子宫腔前、后壁正常内膜各２条。将刮取的内膜组织置入盛