毕业论文【设计】基于流式细胞仪的水中细菌总数和藻类的快速测定与研究

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1、目录摘要IAbstractII第1章绪论1第2章流式细胞仪的原理及应用现状12.1流式细胞仪工作原理12.1.1液流系统22.1.2光路系统22.1.3检测分析系统32.2流式细胞仪操作步骤32.3流式细胞术在国内外应用的现状4第3章细菌的计数53.1平板菌落计数法53.1.1实验仪器和材料53.1.2实验步骤53.2流式细胞仪计数法63.3细菌测定结果6第4章藻细胞的计数84.1显微镜计数法84.1.1实验基本原理84.1.2实验器材84.1.3操作步骤84.2流式计数法94.3结果与讨论94.4藻细胞的梯度测试114.5实

2、时监测藻类和水中细菌的数目变化14第5章藻的死活状态分析155.1藻细胞死活状态检测155.2实验结果与分析16第6章藻的毒性测试材料与方法186.1材料186.1.1实验材料186.1.2实验仪器与设备186.1.3实验试剂186.2实验方法206.3羊角月牙藻的毒性测试206.3.1实验条件206.3.2藻类培养基的配制206.3.3羊角月牙藻的培养216.4藻的死活状态、凋亡状态分析以及DNA含量测定236.4.1藻的死活状态分及凋亡状态分析236.4.2DNA周期分析24第7章藻的毒性机理研究267.1四溴的毒性效应2

3、67.24溴的毒性效应277.3十溴的毒性效应287.4PFOS的毒性效应297.5Fe(NO3)3的毒性效应307.6Pb(NO3)2的毒性效应317.7Cd(NO3)3的毒性效应31第8章结论与展望328.1结论328.2展望33致谢34参考文献35附录37基于流式细胞仪的水中细菌总数和藻类的快速测定与研究摘要:本文的研究对象是水中细菌和藻类,使用的仪器主要是流式细胞仪,运用流式细胞仪对细菌总数和藻类进行测定,并尝试着尽可能多的利用流式细胞仪对研究对象进行深入的多方面的探讨.本文主要研究内容有以下几个方面:(1)分别采用平

4、板计数法和流式计数法对水中细菌进行计数,观察比较得出结论:流式细胞仪计数和传统的平板计数法之间存在着较好的线性关系,(R2>0.900),因此,可以直接用流式细胞仪对细菌进行测定.(2)分别对藻类(本实验使用的藻类全部为羊角月牙藻)采用显微镜直接观察计数和流式细胞仪计数,将结果进行分析观察比较,可得出结论:藻的流式细胞仪计数及显微计数之间存在着很好的线性关系(R2>0.950),可以直接用流式细胞仪对藻类进行测定,且对藻类的计数比细菌的更加精确.(3)除了直接计数之外,本研究还对藻细胞的死活状态进行鉴定,采用的是SYBRGre

5、enⅠ和碘化丙啶双染色的方法,通过将藻细胞煮沸杀死,按照死亡比例分别为0%、25%、50%、75%、100%进行检测,观察相应的密度图可以明显的区分出死活细胞的大致分布和既定的比例之间有非常好的关系.(4)探究重金属及有机污染物对藻类的毒性机制,分析致毒过程是否和细胞膜的损伤、细胞凋亡以及细胞周期有所关联,实验表明:毒性越强,藻的细胞膜损伤越严重,细胞死活之比越高;细胞的凋亡状态与毒性物质的关系不太明显;细胞周期中G1期的变化波动性较大,但是总体呈现一个下降的趋势,S期的变化大致是先增加后趋于平缓,G2期走势也是不断降低的.关

6、键词:流式细胞术细菌藻类快速检测死活鉴定细胞周期III47RapidDetectionandResearchofBacteriaandAlgaeinWaterbyFlowCytometryAssayAbstract:Atpresent,thedeterminationofthetotalnumberofbacteriainwaterisusuallyflatplatecountingmethod,butthemethodiscomplex,heavyworkload,andcanonlymeasurelessthan1%oft

7、henumberoflivebacteriainthewater,andittakesatleast24hours.Soitisverynecessarytoestablishamorecomprehensive,fasterdetectionmethod,thatis,flowcytometry.Thistechnologyusestheflowcytometer,itisanewhigh-techequipmentwhichbeginsinthelate1960s,itcombinestheapplicationofflu

8、id,optics,electronics,biology,immunologyandotherdisciplinesandtechnologyinone.Thecoreofitstechnologyistheflowcytometry,usingtheflowcytomet

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