芽孢杆菌发酵中药复方及抑菌活性的检测

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1、芽孢杆菌发酵中药复方及抑菌活性的检测中草药饲料添加剂属于天然药物，大量实验研究表明，中草药饲料添加剂具有促进动物生长发育（李宗辉等，2002）、提高饲料转化率、改善畜禽产品质量（李洪龙等，2007；刘根新等，2007）、增强动物免疫功能等作用（王丽辉等，2007），其研究和应用已受到国内外学者的普遍关注。随着对中药制剂的深入研究，微生物发酵中药成为一种新的中药炮制方法。微生物具有非常丰富的酶系统，具有强大的分解、转化物质的能力，通过微生物的降解作用，中药的有效成分和活性物质被最大限度的释放出来。另外，微生物发酵中药的过程中

2、，中药的一些成分可能诱导微生物的某些代谢途径发生变化，从而产生新的活性物质（韩春杨等，2005）。科宝天然植物草粉主要成分为脱毒紫茎泽兰草粉，目前已经作为饲料添加剂大量应用于畜牧生产，具有提高生产性能、抑菌及抗病毒的作用。紫锥菊具有显著的免疫增强和抗病毒作用，是国际上研究比较热门的免疫调节剂（肖培根，1996）。中药板蓝根具有清热、解毒之功效。实验中选用公司菌种保藏中心保存的三株性能较好的芽孢杆菌，芽孢菌7348、Zfy4、地衣芽孢菌对植物草粉、板蓝根、紫锥菊的不同组方进行发酵，并检测了发酵产物对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色

3、葡萄球菌的抑菌作用，筛选最佳发酵菌株及中药组方，旨在为研发出新型抗菌、抗病毒产品提供理论依据。1材料和方法1.1材料菌株：芽孢菌7348、Zfy4、地衣芽孢菌由山东宝来利来生物研究院菌种保藏中心保存；指示菌：大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌由山东宝来利来生物研究院菌种保藏中心保存。中药：科宝天然植物草粉由昆明科宝饲料有限公司提供；板蓝根购买自永春堂药店；紫锥菊由陕西嘉禾药业提供。1.2方法1.2.1复方中药分组，见表1。1.2.2中药发酵[摘要]本文开展了芽孢杆菌7348、Zfy4、地衣芽孢菌对植物草粉、板蓝根、紫锥菊的

4、不同组方进行发酵，并检测了发酵产物对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌的生长抑制作用。实验结果显示：芽孢菌7348发酵中药复方2和复方5，发酵后芽孢菌活菌数最高，且对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌具有显著地抑菌作用。研究结果表明芽孢菌发酵中药的过程中，微生物与中草药的相互作用，使中药复方的有效成分被释放出来，从而增强了中药复方的抗菌活性。[关键词]芽孢杆菌；发酵；中药复方；抑菌活性中药复方植物草粉：板蓝根：紫锥菊组方15︰1︰4组方25︰2︰3组方35︰1︰:1组方45︰3︰2组方55︰4︰1表1复方中药分组·24·表

5、3中药复方发酵液对大肠杆菌、沙门氏菌的抑制作用中药复方/菌株未发酵7348地衣芽孢菌Zfy4大肠杆菌沙门氏菌大肠杆菌沙门氏菌大肠杆菌沙门氏菌大肠杆菌沙门氏菌培养基——————组方1——低敏中敏————组方2低敏低敏中敏高敏——低敏中敏组方3低敏低敏中敏高敏————组方4————————组方5低敏低敏高敏高敏——低敏低敏注：抑菌圈直径大于20mm为极敏，抑菌圈直径15～20mm为高敏，抑菌圈直径为10～15mm为中敏，抑菌圈直径小于10mm为低敏，无抑菌圈的为不敏感，用“-”表示。表2芽孢菌菌株生长的影响（CPU×108）中

6、药复方/菌株7348地衣芽孢菌Zfy4芽孢培养基2.042.852.1组方112.00.00112.6组方211.00.001514.8组方313.80.0019.3组方47.20.00214.9组方515.80.001511.3广东饲料第22卷第11期2013年11月试验研究将中药磨粉后，按照组方比例混匀称取8g于250mL的三角瓶中，加入80mL纯净水，121℃灭菌30min，每瓶按照4%浓度接入芽孢杆菌菌液，37℃、转速180/min摇床培养30h，并设未发酵中药、芽孢菌菌液为对照。1.2.3平板计数法检测活菌数发酵

7、30h后，终止发酵，每瓶取1mL发酵液于含9mL的生理盐水的试管中，充分震荡均匀后取1ml于下一个试管中，以此倍比稀释到所要的稀释度（本实验取10-5、10-6、10-7、10-8个稀释度），将每个稀释度取1mL滴在灭菌平板上，两个重复，然后加入50℃芽孢培养基，摇匀，37℃培养24h，进行菌落计数。1.2.4体外抑菌实验（牛津杯法）吸取15mLLB（1.5%的琼脂）培养基倒入灭菌培养皿中，使其在平皿的底部均匀分布、凝固，作为底层，吸取指示菌液适量加入下层已凝固的平皿中，同时加入5mL，50℃上层LB（0.8%琼脂粉）培养

8、基中，充分摇匀，作为菌层。在每个平板上放置已灭菌的牛津杯（直径为8mm）5个，稍微下压，使其与平板培养基无缝隙。发酵液进行离心，取上清液280μL加入到牛津杯中，静置5~10min，放入37℃培养箱中过夜，次日测量抑菌圈大小并记录。抑菌圈直径大于20mm为极敏，抑菌圈直径15～20mm为高敏，抑菌圈直径