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时间:2018-07-07
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1、微小颗粒骨复合细胞移植治疗大鼠骨缺损 【Abstract】AIM:Toinvestigatethebinedtreatmenteffectsofautogeicminimalmorselizedboneandallogeniccellsonratcranialdefect.METHODS:Cranialdefectinratmodelsinimalmorselizedbonegraftandallogeniccelltransplantation[osteoblastsormarroalcells(MSC)].XrayedtoexaminethemRNAexpr
2、essionsofTGFβ1andbFGF.RESULTS:IntheorderofbinedtreatmentgroupA(morselizedboneandosteoblastgraft),binedtreatmentgroupB(morselizedboneandMSCgraft),binedtreatmentgroupC(minimalmorselizedboneonly),theuniontimeofcranialdefectprolongedas(7.33±0.44)ergedintheorder(P<0.05betinimalmorselize
3、dboneandallogeniccellsacceleratetherepairmentofcranialdefectandtheexpressionofcellfactors. 【Keyinimalmorselizedbone 【摘要】目的:观察自体微小颗粒骨复合骨髓基质细胞(MSC)或成骨细胞移植修复大鼠骨缺损的治疗效果.方法:制作大鼠颅骨缺损动物模型,培养同种异体新生大鼠的MSC及成骨细胞,复合自体颗粒骨后植入骨缺损区,X线摄片观察骨愈合情况;RTPCR检测转化生长因子β1(TGFβ1),碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达水平.结果:植入微小颗粒骨
4、复合成骨细胞组颅骨缺损愈合最快(7.33±0.44)L/L胎牛血清冲,CO2培养箱,Ⅱ型胶原酶均购自美国Sigma公司. 1.2方法将大鼠随机分为3组:单纯微小颗粒骨植入组(第1组),微小颗粒骨复合骨髓基质细胞(marroalcells,MSC)组(第2组),微小颗粒骨复合成骨细胞组(第3组),每组48只.SD大鼠处死后750mL/L乙醇浸泡5min,双侧股骨髓腔DMEM加150mL/L胎牛血清冲洗,冲洗液加入培养瓶中置入CO2培养箱中培养MSC.取颅盖骨剪碎,以Ⅱ型胶原酶(1g/L)消化法[3]培养成骨细胞.每3d换液1次,长满瓶后消化,1∶2传代. 1.2
5、.1颅骨缺损的修复实验动物取髂嵴切口,取自体髂骨约1000mg磨钻制成直径300~500μm的颗粒,分别取培养的MSC及成骨细胞,消化后调整计数5×108/L,取5mL与颗粒骨混合后37℃水浴震荡90min备用.颅骨正中切口,显露大鼠顶骨及额骨,左侧顶骨正中制作5mm全层骨缺损,注意保持硬膜完整.颗粒骨及细胞混合液离心,将离心管底复合的颗粒骨及细胞植入骨缺损区,缝合切口.第1组:单纯植入颗粒骨;第2组:植入颗粒骨及MSC;第3组植入颗粒骨及成骨细胞.植入后3,5,7,9,15,21,36和56d取材进行TGFβ1及bFGFmRNA检测.第2,4,6,8,10,12
6、,14和16RNA检测骨组织研碎后按TRIZOL试剂盒说明进行组织RNA提取.按文献[4]提供的序列由上海博亚公司合成引物.TGFβ1序列:上游引物:TACATTGACTTTAGGAAGGA;下游引物:ATCATGTTGGACAACTGATCC.扩增产物长度252bp,βactin扩增产物长度500bp.bFGF序列:上游引物:GCGACCCACACGTCAAACTACAGC;下游引物:ACTGCCCAGTTCGTTTCAGTGCCA.扩增产物长度231bp,βactin扩增产物长度500bp.按说明书进行反转录及PCR扩增.产物15g/L琼脂糖上电泳. 图1颗
7、粒骨复合MSC缺损修复时TGFβ1mRNA的表达(略) 图2颗粒骨复合MSC缺损修复bFGFmRNA的表达(略) 3讨论 自体骨移植是治疗骨缺损的有效方法,近年微小颗粒骨移植有见报告.我们发现复合成骨细胞后,微小颗粒骨修复骨缺损加快,其TGFβ1基因表达高峰提前,表达水平也升高,同时bFGF表达高峰也提前.复合基质细胞后成骨效果优于单纯微小颗粒骨移植,这两种基因的表达较单纯植入颗粒骨组提前.本实验说明自体微小颗粒骨可以和细胞结合,进行复合移植修复骨缺损,移植细胞和颗粒骨可以协同作用,提高成骨效果. 细胞和载体复合方法很多[3-5],包括浸渍法、沉淀法、吸附
8、法、凝胶法
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