微小颗粒骨复合细胞移植治疗大鼠骨缺损

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1、微小颗粒骨复合细胞移植治疗大鼠骨缺损　　【Abstract】AIM:Toinvestigatethebinedtreatmenteffectsofautogeicminimalmorselizedboneandallogeniccellsonratcranialdefect.METHODS:Cranialdefectinratmodelsinimalmorselizedbonegraftandallogeniccelltransplantation［osteoblastsormarroalcells(MSC)］.XrayedtoexaminethemRNAexpr

2、essionsofTGFβ1andbFGF.RESULTS:IntheorderofbinedtreatmentgroupA(morselizedboneandosteoblastgraft),binedtreatmentgroupB(morselizedboneandMSCgraft),binedtreatmentgroupC(minimalmorselizedboneonly),theuniontimeofcranialdefectprolongedas(7.33±0.44)ergedintheorder(P<0.05betinimalmorselize

3、dboneandallogeniccellsacceleratetherepairmentofcranialdefectandtheexpressionofcellfactors.　　【Keyinimalmorselizedbone　　【摘要】目的：观察自体微小颗粒骨复合骨髓基质细胞（MSC）或成骨细胞移植修复大鼠骨缺损的治疗效果.方法：制作大鼠颅骨缺损动物模型，培养同种异体新生大鼠的MSC及成骨细胞，复合自体颗粒骨后植入骨缺损区，X线摄片观察骨愈合情况；RTPCR检测转化生长因子β1（TGFβ1），碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达水平.结果：植入微小颗粒骨

4、复合成骨细胞组颅骨缺损愈合最快（7.33±0.44）L/L胎牛血清冲，CO2培养箱，Ⅱ型胶原酶均购自美国Sigma公司.　　1．2方法将大鼠随机分为3组：单纯微小颗粒骨植入组(第1组)，微小颗粒骨复合骨髓基质细胞（marroalcells,MSC)组(第2组)，微小颗粒骨复合成骨细胞组(第3组)，每组48只.SD大鼠处死后750mL/L乙醇浸泡5min，双侧股骨髓腔DMEM加150mL/L胎牛血清冲洗，冲洗液加入培养瓶中置入CO2培养箱中培养MSC.取颅盖骨剪碎，以Ⅱ型胶原酶（1g/L）消化法［3］培养成骨细胞.每3d换液1次，长满瓶后消化，1∶2传代.　　1.2

5、．1颅骨缺损的修复实验动物取髂嵴切口，取自体髂骨约1000mg磨钻制成直径300~500μm的颗粒，分别取培养的MSC及成骨细胞，消化后调整计数5×108/L，取5mL与颗粒骨混合后37℃水浴震荡90min备用.颅骨正中切口，显露大鼠顶骨及额骨，左侧顶骨正中制作5mm全层骨缺损，注意保持硬膜完整.颗粒骨及细胞混合液离心，将离心管底复合的颗粒骨及细胞植入骨缺损区，缝合切口.第1组：单纯植入颗粒骨；第2组：植入颗粒骨及MSC；第3组植入颗粒骨及成骨细胞.植入后3,5,7,9,15,21,36和56d取材进行TGFβ1及bFGFmRNA检测.第2,4,6,8,10,12

6、,14和16RNA检测骨组织研碎后按TRIZOL试剂盒说明进行组织RNA提取.按文献［4］提供的序列由上海博亚公司合成引物.TGFβ1序列：上游引物：TACATTGACTTTAGGAAGGA；下游引物：ATCATGTTGGACAACTGATCC.扩增产物长度252bp，βactin扩增产物长度500bp.bFGF序列：上游引物：GCGACCCACACGTCAAACTACAGC；下游引物：ACTGCCCAGTTCGTTTCAGTGCCA.扩增产物长度231bp，βactin扩增产物长度500bp.按说明书进行反转录及PCR扩增.产物15g/L琼脂糖上电泳.　　图1颗

7、粒骨复合MSC缺损修复时TGFβ1mRNA的表达（略）　　图2颗粒骨复合MSC缺损修复bFGFmRNA的表达（略）　　3讨论　　自体骨移植是治疗骨缺损的有效方法，近年微小颗粒骨移植有见报告.我们发现复合成骨细胞后，微小颗粒骨修复骨缺损加快，其TGFβ1基因表达高峰提前，表达水平也升高，同时bFGF表达高峰也提前.复合基质细胞后成骨效果优于单纯微小颗粒骨移植，这两种基因的表达较单纯植入颗粒骨组提前.本实验说明自体微小颗粒骨可以和细胞结合，进行复合移植修复骨缺损，移植细胞和颗粒骨可以协同作用，提高成骨效果.　　细胞和载体复合方法很多［3-5］，包括浸渍法、沉淀法、吸附

8、法、凝胶法