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1、微小颗粒骨复合细胞移植治疗大鼠骨缺损麻松，阎景龙，林欣，潘海涛，王新涛，杨显生【关键词】颅骨缺损；骨移植；细胞移植；微小颗粒骨 Treatmentofratcranialdefectinimalmorselizedboneandallogeniccells 【Abstract】AIM:Toinvestigatethebinedtreatmenteffectsofautogeicminimalmorselizedboneandallogeniccellsonratcranialdefect.ME
2、THODS:Cranialdefectinratmodelsinimalmorselizedbonegraftandallogeniccelltransplantation〔osteoblastsormarroalcells(MSC)〕.XrayedtoexaminethemRNAexpressionsofTGFβ1andbFGF.RESULTS:IntheorderofbinedtreatmentgroupA(morselizedboneandosteoblastgraft),binedtrea
3、tmentgroupB(morselizedboneandMSCgraft),binedtreatmentgroupC(minimalmorselizedboneonly),theuniontimeofcranialdefectprolongedas(7.33±0.44)ergedintheorder(P0.05betinimalmorselizedboneandallogeniccellsacceleratetherepairmentofcranialdefectandtheexpression
4、ofcellfactors. 【Keyinimalmorselizedbone 【摘要】目的：观察自体微小颗粒骨复合骨髓基质细胞（MSC）或成骨细胞移植修复大鼠骨缺损的治疗效果.方法：制作大鼠颅骨缺损动物模型，培养同种异体新生大鼠的MSC及成骨细胞，复合自体颗粒骨后植入骨缺损区，X线摄片观察骨愈合情况；RTPCR检测转化生长因子β1（TGFβ1），碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达水平.结果：植入微小颗粒骨复合成骨细胞组颅骨缺损愈合最快（7.33±0.44）L/L胎牛血清冲，CO2培养箱，
5、Ⅱ型胶原酶均购自美国Sigma公司. 1．2方法将大鼠随机分为3组：单纯微小颗粒骨植入组(第1组)，微小颗粒骨复合骨髓基质细胞（marroalcells,MSC)组(第2组)，微小颗粒骨复合成骨细胞组(第3组)，每组48只.SD大鼠处死后750mL/L乙醇浸泡5min，双侧股骨髓腔DMEM加150mL/L胎牛血清冲洗，冲洗液加入培养瓶中置入CO2培养箱中培养MSC.取颅盖骨剪碎，以Ⅱ型胶原酶（1g/L）消化法〔3〕培养成骨细胞.每3d换液1次，长满瓶后消化，1∶2传代. 1.2．1颅骨缺损的修
6、复实验动物取髂嵴切口，取自体髂骨约1000mg磨钻制成直径300~500μm的颗粒，分别取培养的MSC及成骨细胞，消化后调整计数5×108/L，取5mL与颗粒骨混合后37℃水浴震荡90min备用.颅骨正中切口，显露大鼠顶骨及额骨，左侧顶骨正中制作5mm全层骨缺损，注意保持硬膜完整.颗粒骨及细胞混合液离心，将离心管底复合的颗粒骨及细胞植入骨缺损区，缝合切口.第1组：单纯植入颗粒骨；第2组：植入颗粒骨及MSC；第3组植入颗粒骨及成骨细胞.植入后3,5,7,9,15,21,36和56d取材进行TGFβ1
7、及bFGFmRNA检测.第2,4,6,8,10,12,14和16RNA检测骨组织研碎后按TRIZOL试剂盒说明进行组织RNA提取.按文献〔4〕提供的序列由上海博亚公司合成引物.TGFβ1序列：上游引物：TACATTGACTTTAGGAAGGA；下游引物：ATCATGTTGGACAACTGATCC.扩增产物长度252bp，βactin扩增产物长度500bp.bFGF序列：上游引物：GCGACCCACACGTCAAACTACAGC；下游引物：ACTGCCCAGTTCGTTTCAGTGCCA.扩增产物长
8、度231bp，βactin扩增产物长度500bp.按说明书进行反转录及PCR扩增.产物15g/L琼脂糖上电泳. 2结果 颅骨缺损修复X线，第3组较早期既有成骨表现，骨缺损愈合时间为(7.33±0.44)RNA的表达（略） 图2颗粒骨复合MSC缺损修复bFGFmRNA的表达（略） 3讨论 自体骨移植是治疗骨缺损的有效方法，近年微小颗粒骨移植有见报告.我们发现复合成骨细胞后，微小颗粒骨修复骨缺损加快，其TGFβ1基因表达高峰提前，表达水平也升高，同时bFGF表达高峰也提前.复
