依曲替酸对角质形成细胞肝素结合表皮生长因子样生长因子mrna的影响论文

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1、依曲替酸对角质形成细胞肝素结合表皮生长因子样生长因子mRNA的影响论文罗素菊，彭振辉，郑焱，张路坤，王蔚，王国荣【摘要】目的研究依曲替酸对培养的正常人角质形成细胞(KC)增殖和肝素结合表皮生长因子样生长因子(HBEGF)mRNA表达的影响。方法0.1和1μmol/L伊曲替酸处理正常人KC12h后，用噻唑蓝比色法(MTT法)和实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RTPCR)法分别检测KC增殖和HBEGFmRNA表达的改变。结果依曲替酸处理12h后，可剂量依赖抑制KC的增殖和上调HBEGFmRNA的表达。0.1和1μmol

2、/L伊曲替酸分别使KC增殖抑制10.2%和14.4%.freelRNA增加到正常对照组的3.2和7.1倍。与对照组相比，差异均有统计学意义(P0.05)。结论依曲替酸可剂量依赖上调HBEGFmRNA的表达，其可能参与依曲替酸对KC增殖的抑制作用。【关键词】表皮生长因子；角质形成细胞；维甲酸EffectofacitretinininducingtheexpressionofheparinbindingepidermalgroRNAinnormalhumankeratinocytesABSTRACT:ObjectiveT

3、oinvestigatethealterationofcellproliferationandheparinbindingepidermalgroRNAexpressioninculturednormalhumankeratinocytesafteracitretintreatment.MethodsAftera12hourincubationol/Lacitretininnormalhumankeratinocytes,theproliferationpotencyofthecellsetricassayandth

4、eexpressionofHBEGFmRNAinedbyrealtimequantitativereversetranscriptionpolymerasechainreaction(RTPCR).ResultsBothkeratinocytesgroRNAexpressionentol/Lacitretininhibitedkeratinocyteproliferationby10.2%and14.4%,andelevatedHBEGFmRNAby3.2and7.1fold,respectively.Conc

5、lusionUpregulatedHBEGFmRNAexpressioninducedbyacitretininnormalhumankeratinocytesmaybeinvolvedinregulatingkeratinocytegroent.KEY)、低糖DMEM、Dispase酶均购于Gibco公司，依曲替酸为重庆华邦制药股份有限公司惠赠，TRIzol试剂购于Invitrogen公司，RTPCR试剂盒购于Fermentas公司，SYBRgreen2×PCR混合液购于ABI公司，PCR配套试剂购于TaKaRa公司

6、，GeneAmp9700PCR仪和PRISM7900PCR仪均为ABI公司产品。1.2原代KC的培养取健康人环切术后包皮，消毒液浸泡后，置于2.5g/LDispase酶4℃消化过夜。次日分离表、真皮，将表皮置于2.5g/L胰酶与0.2g/LEDTA(1∶1)混合液中，消化10min，用含100mL/L胎牛血清的DMEM终止消化，吹打后，100目筛网过滤，离心收集细胞，加入KCSFM，接种入培养瓶，于37℃、50mL/LCO2条件下培养，次日更换新培养基，以后每3d换液一次，取3-5代细胞进行实验5。将实验细胞传代入6孔培

7、养板中，当细胞90%融合时，进行干预处理，继续培养12h。每组设3个孔，并设置未处理的正常对照组。1.3MTT法检测细胞的增殖将处于对数生长期的细胞接种于96孔培养板，加入含0.1或1μmol/L依曲替酸的培养液，继续培养12h。设空白对照组(只加细胞培养液，无细胞)。吸出培养液，每孔中加入MTT(5mg/mL)后再孵育4h，弃上清液后每孔加入二甲基亚砜150μL，振荡10min。以空白对照组为基准，在490nm波长处检测吸光度值。生长抑制率(%)=1-A490nm(实验组细胞)/A490nm(对照组细胞)×100%。1.

8、4总RNA的提取和cDNA的合成按10cm2(培养瓶面积)加入1mLTRIzoL提取总RNA，操作严按试剂盒说明进行。用12g/L琼脂糖凝胶电泳鉴定RNA的完整性，用紫外分光光度计测RNA含量和纯度。cDNA的合成操作严格按试剂盒说明进行。1.5实时荧光定量RTPCR检测HBEGFmRNA的表达用1