双相陶瓷生物活性骨的制备及其细胞相容性研究

《双相陶瓷生物活性骨的制备及其细胞相容性研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、双相陶瓷生物活性骨的制备及其细胞相容性研究：彭吾训，王蕾，李彦林，修晓光，赵宏斌，龚跃昆，赵学凌，李世和，胡蕴玉【摘要】［目的］制备一种双相陶瓷生物活性骨，并了解其细胞相容性。［方法］分离培养兔骨髓基质干细胞(mesenchymalstemcells，MSCs)，将浓度为1×106／ml的第3代MSCs接种于复合有I型胶原、骨形态发生蛋白(bonemorphogekprotein，BMP)和碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgroicbioiogicbone，BCBB)上，联合培养，用倒置相差

2、显微镜、扫描电子显微镜观察，测定光密度（OD）值，了解双相陶瓷生物活性骨BCBB／BMP／bFGF的细胞相容性。［结果］BCBB孔内充满I型胶原、BMP及bFGF。MSCs在双相陶瓷生物活性骨BCBB／BMP／bFGF上黏附生长，第6d时细胞在材料表面形成致密细胞层，增殖达稳定状态。［结论］该研究制备的双相陶瓷生物活性骨BCBB／BMP／bFGF具有良好的细胞相容性。【关键词】双相陶瓷生物骨；骨形态发生蛋白；碱性成纤维细胞生长因子；骨髓基质干细胞；生物相容性Abstract:［Objective］Toprepar

3、eakindofbiphasicceramicbiologicactiveboneandstudyitsbiopatibility.［Method］Biphasicceramicbiologicbone(BCBB)ixedorphogeicprotein(BMP)andbasicfibroblastgroesenchymalstemcells(MSCs)icroscope,scanningelectronmicroscope(SEM)andexaminedusingmethylthiazoltetrazolium

4、(MTT).［Result］BiphasicceramicbiologicactiveboneBCBB/BMP/bFGFanidealtissueengineeringbone,andthecellsquantityostonthe6thday.［Conclusion］BCBB/BMP/bFGFpossessesagoodbiopatibilityesenchymalstemcells.Keyicbiologicbone(BCBB);bonemorphogeicprotein;basicfibroblastgro

5、esenchymalstemcells;biopatibility骨组织工程的研究主要集中在支架材料、种子细胞、生长因子、组织器官的构建等方面，而支架材料细胞相容性是材料能否应用于临床的重要因素。骨髓基质干细胞(Mesenchymalstemcells，MSCs)是目前骨组织工程最有临床应用前景的种子细胞［1］。骨形态发生蛋白(bonemorphogeicprotein，BMP)和碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgroicbiologicbone，BCBB)联合培养，了解双相陶瓷生物活性骨B

6、CBB／BMP／bFGF的细胞相容性，为进一步研究奠定基础。1材料和方法1.1双相陶瓷生物活性骨(BCBB／BMP／bFGF)的制备BMP由第四军医大学西京医院全军骨科研究所提供，已经小鼠肌袋实验证明有骨诱导活性。称取600mgBMP溶于10ml浓度为4mol／L盐酸胍溶液中，置4℃冰箱中保存24h后，取出后匀浆，然后4℃透析48h，每24h更换透析液1次，得到BMP溶液。取碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)每支150万IU／mg，用1ml蒸馏水溶解后，分装为10份，每份100μL含bFGFl5万IU。分别各取b

7、FGF溶液96000IU(64000ng)。取I型胶原溶液20ml，与上述BMP溶液和bFGF溶液混合，电磁震荡器震荡10min，将混合液与60块0.5cm×0.5cm×0.5cm大小的BCBB骨粒及5mm×5mm×1mm薄片20块充分混匀(每块骨粒含BMP10mg，bFGF1600IU)，负压抽吸、冻干，制得双相陶瓷生物活性骨。环氧乙烷消毒后无菌条件下封装备用，同时留样品送细菌培养，并证实无细菌生长。1.2双相陶瓷生物活性骨的结构观察从冻干后的双相陶瓷生物活性骨中取样，做扫描电镜(SEM)观察。1.3MSCs的

8、分离培养两周龄日本大耳兔5只，昆明医学院动物中心提供，体重约150～200g(合格证号：滇实动证第2003064号)。脱颈处死，0.1%的新洁尔灭中浸泡10min，无菌条件下剥离出双侧股骨、胫骨，PBS冲洗3遍。注射器吸取L-DMEM培养基冲洗股骨、胫骨髓腔，将含有骨髓的冲洗液转入离心管，800r／min离心10min，弃去上清液，加入L-DMEM完全培养基10ml(青霉