脐带血基础免疫物质分析

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1、脐带血基础免疫物质分析【摘要】　　目的：通过胎儿脐带血免疫状况的研究，为脐带血有形和无形成分在免疫方面的应用提供理论依据。方法：应用血液常规检验、试剂盒以及液体闪烁计数仪和流式细胞仪对白细胞分类、免疫球蛋白、细胞因子、脐血T细胞抗原表面标志和脐血有核细胞NK活性进行测定。结果：与成人外周血中免疫成分相比，胎儿脐带血中IgA和IgE含量明显减少，IgG无明显改变；脐血浆中GCSF和GMCSF分别为成人外周血的11.37倍和15.81倍，TNF略低于成人外周血；中性粒细胞接近成人外周血低值，中、晚幼粒细胞数明显低于成人外周血，淋巴细胞

2、与成人外周血相当，NK细胞活性亦略低于成人外周血；脐带血T细胞亚群CD3+、CD4+和CD8+细胞数低于成人外周血，而CD34+和CD45RA细胞则高于成人外周血。结论：脐血中富含大量的GCSF和GMCSF等相关造血因子和原始的造血干细胞成分，虽然淋巴细胞的发育多处于幼稚期，但大量相关的免疫细胞和细胞因子均可作为免疫治疗的基础物质。【关键词】细胞因子类免疫球蛋白类血液脐带　　［Abstract］Objective:Tostudytheimmunitystateoffoetuscordblood,soastoprovidetheor

3、tybasisfortheapplicationofimmunologicalsubstancesfromfoetuscordbloodinhematoplasmaimmunotherapy.Methods：Usingbloodroutinetestkits,liquidscintillationcounterandfloetrytodetectleukocyteclassfication,immuneglobulin,TcellantigensurfacemarkerandNKcellrespectively.Results：IgA

4、andIgEincordblooduchlessthaninadultperipheralblood,butIgGeasthatinadultperipheral.GCSFandGMCSFincordbloodplasmaesrespectivelyofthoseinadultperipheralblood,ornecrosisfactor(TNF)itinadultperipheralblood.Metagranulocyteandmyelocytelevelsonocyteleveleasthatofadult.Thecoun

5、tsofsubpopulationsCD3+,CD4+,CD8+ofTcellincordbloodopoiesisfactorsandnativehematopoieticstemcellponents,GCSFandGMCSF,areabundantincordbloodandcanbemunotherapy,eventhoughmostTlymphocytesincordbloodareinnaivestagesofdevelopment.　　　［Keymunoglobulins；blood；umbilicalcord　　脐

6、血中的有形和无形成分与脐血的免疫活性密切相关，各种活性因子的存在对不同脐血细胞的发育和功能起重要的调节作用[1～3]。这些活性因子和免疫细胞既与脐血造血干细胞或祖细胞的成功移植密切相关,也与脐血中的免疫成分在抗肿瘤中的广泛应用有关。有关脐血中的有形和无形免疫活性成分的检测国内报道很少，研究脐血中相关的基础免疫物质具有十分重要的意义。　　1材料与方法　　1.1胎儿脐带血采自产科健康成人孕妇的足月正常胎儿脐带，胎儿娩出后立即用止血钳夹住脐带，一把止血钳用脐带圈套好，距脐轮1cm处夹住脐带，另一把钳与此相距2cm，并立即剪断脐带。迅速选择母

7、体端脐带血管鼓起处作为穿刺部位，常规消毒采血，肝素抗凝袋搜集，6h内应用。　　1.2免疫球蛋白检测　　用酶联免疫吸附方法检测，试剂盒购自美国EIBIO公司，检测方法按试剂盒说明书操作。　　1.3细胞因子　　检测试剂盒GCSF、GMCSF、TNF购自北京吉比埃生物技术开发有限公司，检测方法按试剂盒说明书操作。　　1.4白细胞分类　　推制厚薄适宜的血涂片，用瑞特染色法染片。油镜下计数200个白细胞，按其形态特征进行分类，计数各类细胞所占百分比的平均值。　　1.5脐血T细胞表面抗原标志　　1.5.1淋巴细胞分离　　无菌抽取成人外周血2m

8、l,EDTA抗凝(每毫升加20g/LEDTA溶液0.5ml)，Hank's液等倍稀释，淋巴细胞分层液分离淋巴细胞(1500r/min，20min)，收获单个核细胞层，Hank's液洗3次(1500r/min，5min)，