结肠癌中runx3基因表达和启动子甲基化及其临床

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1、结肠癌中RUNX3基因表达和启动子甲基化及其临床【摘要】目的探讨RUNX3基因表达和启动子甲基化在结肠癌发生发展过程中的作用及其临床意义。方法采用RT-PCR方法检测RUNX3基因表达，用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测RUNX3基因启动子甲基化。结果47例结肠癌中，癌旁肠粘膜、原发灶、肝转移灶中RUNX3表达阳性率分别为100%(47/47)、38.3%(18/47)、14.3%(1/7)。原发灶和肝转移灶中RUNX3表达明显降低(P<0.01)。癌旁肠粘膜组织、癌原发灶、肝转移灶组织中RUNX3基因启动子甲基化阳性率分别为10.6%(5/4

2、7)，44.7%(21/47)，57.1%(4/7)，3种组织RUNX3基因启动子甲基化率的差别有显著性意义(P<0.01)。在7例出现肝转移者中发生RUNX3失活者6例，其中4例(66.7%)存在RUNX3基因启动子甲基化。结论RUNX3基因启动子甲基化和RUNX3蛋白表达在结肠癌的癌旁组织和原发癌灶间存在显著的差异，可能与结肠癌的发生发展有关。【关键词】结肠癌;RUNX3;DNA甲基化　　Abstract：ObjectiveTostudythefunctionandclinicsignificanceofexpressionandmethyla

3、tionofRUNX3geneinpromoterregioninthegenesisandprogressofcoloncancer.MethodsMethylationspecificPCRethylationofRUNX3promoterregion.ExpressionofRUNX3inedbyRT-PCR.ResultsIn47casesofcoloncancer,RUNX3expressionoralmucousmembrane,primarycancerfociandhepaticmetastasisrespectively.RUNX3ex

4、pressioninprimaryfociandhepaticmetastasisoralmucousmembrane(P<0.01).MethylationofRUNX3promoterinparatumourmucousmembrane,primaryfociandhepaticmetastasisetastasis,4(57.1%)otermethylation.ConclusionsMethylationofRUNX3promoterleadstoinhibitionofRUNX3geneincoloncancer.　　KeyRNA的表达。

5、RUNX3上游引物：5′-GATGGCAGGCAATGACGA-3′，下游引物：5′-TGCTGAAGTGGCTTGTGGT-3′，扩增片段长度：353bp。GAPDH上游引物：5′-AACGGATTTGGTCGTATTG-3′，下游引物：5′-GGAAGATGGTGATGGGATT-3′，扩增长度：208bp。　　1.4DNA的亚硫酸氢钠修饰　　在50μL体积中加入DNA1μg，NaOH(终浓度0.2M)，于37℃变性10min，加新鲜配置的对二苯酚(10mM)30mL和亚硫酸氢钠(3M)52μL，50℃，16h。用SP分析RUNX3基因甲基化状态　　

6、采用MSP(methylation，specificPCR，MSP)法对结肠癌RUNX3基因甲基化状态进行了检测。RUNX3甲基特异性引物，上游引物5′-CGTCGGGTTAGCGAGGTTTC-3′，下游引物5′-GCCGCTACCGCGAAAAACGA-3′。RUNX3未甲基化引物，上游引物5′-GTGGGTGGTTGTTGGGTTAGT-3′，下游引物5′-TCCTCAACCACCACTACCACA-3′。PCR反应总体积25μL，其中含有经亚硫酸氢钠修饰后的DNA3μL，10×ExTagBuffer2.5μL，引物各1μL，dNTP2μL，TaK

7、aRaExTaq0.5μL。PCR反应条件为首次95℃变性3min，然后95℃变性30s，63℃退火30s，72℃延伸30s，最后72℃延伸5min，共40个循环。取PCR产物5μL，在2%琼脂糖凝胶中电泳，紫外灯下照相。高云升：结肠癌中RUNX3基因表达和启动子甲基化及其临床意义辽宁医学院学报2008年8月，29(4)　　1.6统计学分析　　利用SPSS11.0软件对RUNX3基因的启动子甲基化状况与临床病理资料之间进行统计学分析，采用χ2(卡方)检验分析不同组别RUNX3基因表达和RUNX3基因启动子甲基化的差别，当P<0.05时被认为有显著性

8、差异。　　2结果　　2.1RUNX3基因启动子甲基化在结肠癌的发生率　　47例结