僵蚕抗凝活性部位中化学成分的初步研究

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1、僵蚕抗凝活性部位中化学成分的初步研究：彭延古　许光明　赵建国　彭新君　曾序求【摘要】：目的探索僵蚕水煎液、醇沉液和凝胶色谱馏分各部位中的抗凝活性成分。方法用水煎煮、60%醇沉处理和凝胶色谱方法制备抗凝活性部位,用化学反应鉴别、氮测定法、电导、紫外吸收光谱和高效液相色谱方法检测各部位中的蛋白质或多肽和氨基酸类及草酸铵等成分。结果僵蚕的水煎煮提取、醇沉和凝胶色谱分离所得抗凝活性部位中,多肽、氨基酸类和草酸铵都是其中的主要成分,其含量在80%以上。醇沉处理使草酸铵含量下降约52%,而多肽、氨基酸类含量仅降低约8%。凝胶色谱净化后,多肽、氨基酸类含量与水煎部位比约提高28

2、%,与醇沉处理部位比约提高39%,而草酸铵含量与醇沉液部位相当,但比水煎煮部位降低约1倍。各部位的固形物中,15种氨基酸含量在40%～50%,占定氮法测定的蛋白质含量的60%～76%；多肽类成分的分子量为1.0～4.4kDa。结论本研究为僵蚕抗凝活性成分的进一步分离纯化提供了实验基础。【关键词】僵蚕　抗凝活性部位　化学成分　凝胶色谱法　高效液相色谱法　氮测定法　　Abstract：ObjectiveToexploretheanticoagulatingactiveponentsinentationandfractionseparatedbygelfiltratio

3、nchromatographyofBombyxBatryticatus.MethodsAnticoagulatingactivefractionsethodsofentationandgelfiltrationchromatography.ponents(suchasporteinsorpolypeptide,aminoacids,oxalicacidammonium)ineachfractioninedbychemicalreactionindentification,Kjeldahlmethod,conductance,UVandHPLC.ResultsPol

4、ypeptide,aminoacidsandoxalicacidammoniumainponentsinanticoagulatingactivefractions,contentoforethan80%.Thecontentofoxalicacidammoniumdecreasedabout52%processedbyalcoholsedimentation,inoacidsonlydecreasedabout8%.Thecontentofpeptidesandaminoacidsincreasedabout28%purifiedbygelfiltrationc

5、hromatographyparedentation.Thecontentofoxalicacidammoniumeastheoneinalcoholsedimentation,butdecreasedabout1timeparedinoacidsakedupto60%～76%ofthecontentofproteinsdeterminedbyKjeldahlmethod.MolecularentalbasisforfurtherseparationandpurificationofanticoagulatingactiveponentsfromBombyxBat

6、ryticatus.　　KeybyxBatryticatus；anticoagulatingactivefractions；chemicalponents；gelfiltrationchromatography；HPLC；Kjeldahlmethod　僵蚕为蚕蛾科昆虫家蚕BombyxmoriL.4～5龄的幼虫感染(或人工接种)白僵菌而致死的干燥体,为传统中药,性味咸、辛、平,归肝、肺、胃经[1]。具熄风止痉、活血通络、化痰散结等功效,可用于治疗急性惊风、癫痫、中风、面瘫及顽固性头痛等。僵蚕含有蛋白质、脂肪酸、氨基酸、草酸铵、白僵菌素以及微量元素等成分[2-4],其

7、水提液在体内外实验中均表现出很强的抗凝、抗血栓、促纤溶及抗内毒素所致红细胞膜损伤等作用[5-7],草酸铵和蛋白质(或多肽)、氨基酸等可能为其主要活性成分[8]。为进一步研究僵蚕的抗凝活性成分,本实验探讨了僵蚕水煎煮液的醇沉液和凝胶色谱分离净化,及其抗凝活性成分中氨基酸和草酸铵等的定性定量分析,现报道如下。　　1实验材料　　ETTERTOLEDO公司)；DDS-ⅡA电导率仪(上海理达仪器厂)；移液枪(0.1mL和1.0mL,日本)；半微量凯氏定氮装置；Z-16和Z-26层析柱(上海化学仪器厂)。制僵蚕(购自湖南振兴中药饮片有限公司)；葡聚糖凝胶(Biotech公司)

8、；凝血酶试