自动酶免疫分析系统中微板置放顺序对结果影响的观察

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1、自动酶免疫分析系统中微板置放顺序对结果影响的观察【关键词】酶联免疫吸附试验　　［摘要］目的：评估RSP100BEPⅢ自动酶免疫分析系统中微板置放顺序对检测结果的影响。方法：评价基本性能，该系统的不精密度；与经典方法比较分析不准确度。将乙肝6项标志物微板置于不同序号检测，以观察该系统中微板置放顺序对结果的影响。结果：RSP100BEPⅢ自动酶免疫分析系统性能良好；对于微板置放顺序，双抗体夹心法和中和法无明显差异，而对竞争抑制法检测结果有显著影响。结论：RSP100BEPⅢ自动酶免疫分析系统可提高酶免疫分析方法的精密度，减轻劳动强度。

2、但应注意竞争抑制法ELISA存在时效性，必须用RSP100加样后立即以BEPⅢ进行后续处理。　　［关键词］酶联免疫吸附试验；自动化；仪器；微板；顺序　　自动酶免疫分析系统在血站系统应用较为普及，针对血源筛选试验的夹心法ELISA检测报道较多［1,2］。我们于2002年引进RSP100BEPⅢ自动酶免疫分析系统，应用于临床免疫学实验室常规ELISA(包括夹心法、竞争法、中和法)工作，1年多来使用表明，医院临床实验室所面对的检测项目和分析模式具有多样性，有必要进行深入探讨。　　1材料与方法　　1.1样本观察样本采用无溶血、无黄疸、无脂

3、血的血清。乙肝质控物由卫生部临床检验中心提供。　　1.2仪器自动酶免疫分析系统RSP100样本分配器(简称RSP100)，瑞士Tecan公司产品。BEPⅢ酶免疫分析仪(简称BEPⅢ)，德国DADEBEHRING公司产品。经典方法所用仪器1575洗板机和550酶标仪，美国BIO－RAD公司产品。　　1.3试剂试剂A由月亮湾(深圳)生物科技有限公司提供；试剂B由英科新创(厦门)科技有限公司提供。　　1.4方法　　1.4.1自动酶免疫分析系统(仪器法)的检测参数和流程严格按照试剂盒说明书编制。检测过程中，先以RSP100分配样本，再置入

4、BEPⅢ自动完成全部后续分析及报告结果。经典法的质控物设定、各操作步骤和结果判定均严格按照试剂盒说明书用人工执行。　　1.4.2基本性能评价　　1.4.2.1不精密度分析在同一微板上将一份混合阳性血清分别以仪器法和经典法重复检测20孔HBsAg，计算批内CV；并将该混合血清分装20份用仪器法连续检测20d，获得吸光度以计算批间CV。　　1.4.2.2与经典方法比较分析不准确度在同一天分别采用仪器法和经典法检测67份血清HBsAg、HBcAb和HBeAb，比较两者阳性百分率(%)。　　1.4.3微板置放顺序观察以检测乙肝6项标志物为

5、例，将各项目微板编出不同序号，在RSP100分配血清后，组合不同顺序置入BEPⅢ中，其中1号位微板项目在7号位重复检测，观察1号位与7号位由于等待处理时间对HBsAg、HBcAb和HBeAb吸光度和阳性率的影响。　　1.4.4统计学分析统计学处理由SPSS软件完成。　　2结果　　2.1系统不精密度检测结果见表1。两法S/CO均值无明显差异，但仪器法批内CV明显低于经典法，批间CV满足实验要求，说明自动酶免疫分析系统具有较好的精密度。　　表1仪器法与经典法检测HBsAg的不精密度比较(略)　　注：※配对资料t检验t=1.4540.0

6、5　　2.2仪器法和经典法不准确度的比较67份样本中，两者的阳性检出率相同，HBsAg为43例(64.2%)、HBcAb为37例(55.2%)、HBeAb为18例(26.9%)；且阳性结果对应的血清样本均一致。结果表明自动酶免疫分析系统单独检测各种类型ELISA项目的准确性高。　　2.3微板置放顺序对检测结果的影响对于试剂A的HBsAg和HBeAb，其微板置于1号位～7号位，吸光度和阳性率没有区别。即在本仪器系统中，已加样本的微板在BEPⅢ内常规滞留时间不影响试验结果。而HBcAb微板置放顺序对试验吸光度和阳性率有明显差异，以1号

7、位实验结果与经典法一致,试剂B也具有相同结果。试剂A检测结果见表2。　　表2在BEPⅢ1号位和7号位微板的试验结果比较(略)　　配对资料t检验＃t=0.1320.05＃＃t=1.1610.05＃＃＃t=3.391>t0.012.724，P<0.01　　配对资料χ2检验※※χ2=0.08<χ20.05(1)3.84，P>0.05※※※χ2=4.63>χ20.05(1)3.84P<0.05　　3讨论　　关于免疫学检验自动化仪器，医院检验科现多引进化学发光仪和电化学发光仪，但因配套试剂价格昂贵，故在常

8、规工作中选择自动酶免疫分析系统势在必行、符合国情。RSP100在样本处理过程中，可以采用多种国产试剂，加样、稀释和标本的处理均达到了自动化、标准化。BEPⅢ根据经典的酶免疫技术原理，其设计合理，通过电脑程序控制和调节加液量，保温时间，洗涤次数等条件