血液替代品的制备及其抗失血性休克的初步研究

《血液替代品的制备及其抗失血性休克的初步研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、血液替代品的制备及其抗失血性休克的初步研究摘　要目的：制备以聚合牛血红蛋白（polyHb）为基质的血液替代品并评价其对失血性休克的复苏效能。［方法］用乙醇酸聚合牛Hb，超滤去除大于1000KD的大分子和小于100KD的小分子，得血液替代品基质poLyHb，用生理溶液平衡后，检测其生物学活性；从股动脉放血诱导大鼠休克，维持平均动脉压35mmHg30min后，按大鼠的失血量输人等量的复苏液。复苏液为全血、乳酸化林格氏溶液及三种用聚合牛血红蛋白（polyHb）制备的血液替代品（6％polyHb溶液、12％polyHb溶液和12％polyHb+GSH溶液）。观

2、察休克大鼠的复苏效果。将数只大鼠于输液后5min活杀，检测缺血再灌的心肌中自由基强度。［结果］牛Hb被聚合并超滤后，polyHb中超过64KD至500KD的组分占88％；polyHb的氧亲和力、血氧饱和度和溶液的溶氧量与全血相近，其溶液粘度低，近似于牛顿液体；从血血、心率和心电图综合来看，12％polyHb+GSH溶液和全血的复苏效果最好，二者无显著差异。12％polyHb+GSH溶液在心肌缺血再灌中产生基比全血稍低，但二者差别不显著。12%polyHb溶液产生的自由基最多。[结论]牛Hb经乙醇醛聚合后，分子量分布、生物学活性和流休力学特性比较理想，1

3、2％polyHb+GSH溶液可有效复苏失血性休克的大鼠并可有效减少缺血再灌时自由基产生，其效能炎似或稍好于全血。关键词：血液替代品牛血红蛋白乙醇醛失血性休克缺血再灌　　将血红蛋白（Hb）聚合是血液替代品研究的重要途径之一。长期以来，人们一直在寻找合适的聚合剂，以便能稳定Hb（α2β2，64KD）四聚体并产生α2β2的寡聚休（＜500KD＝。稳定四聚体结构可阻止Hp裂解为αβ二聚体从而防止肾损伤。α2β2的血浆半寿期只有2～4h，形成寡聚体则可将半寿期延长并可降低胶体渗透压和粘度。目前已有数种聚合的Hb产品在美国进入了Ⅲ临床试验。　　1983年，Acha

4、rya报道用乙醇醛成功聚合了RNase，随后又有报道用乙醇醛可聚合羟甲基Hb和天然人Hb。乙醇醛聚合的人Hb性质稳定，但未见有关的迸一步研究报道。　　本实验首次用乙醇醛聚合牛Hb，研究了反应产物聚合牛血红蛋白（polymerized　bovineHb，polyHb）的生物学活性和流体力学特征，建立了主要以血压为指标的失血性休克的大鼠模型，比较了全血、乳酸化林格氏（LR）溶液以及用聚合牛血红蛋白（polyHb）制备的血液替代品（6％polyHb溶液、12％polyHb溶液和12％polyHb+GSH溶液）的复苏效果。材料和方法材料：　　试剂：乙醇醛（Si

5、gma），NaBh4（Acros），SephacrylS-300（Phamacia），凝胶过滤高分子量子量子量校准试剂盒（Phamacia），蛋白质低分子量极准（Sigma），戊巴比妥钠（北京芳草医药化工），谷胱甘肽（GSH）（Sigma），其余皆为分析纯。　　仪器：2XZ型旋片真空泵（浙江临海精工真空设备厂），235／200高压液相色谱仪（PERKINELMER），SK-GELG4，OOOSillipore），ABL520血气分析仪（Radiometer），KJB3粘度仪（北京科海公司道生理记录仪）（NHONDOHDEN），ESP300电子自旋共振仪

6、（BRUKER），输液泵（上海沪西分析仪器厂）等。　　原料：无基质牛Hb，用板框过滤法制备。　　生理透析液：110mMNaCl，3.5mMKCl，1mMMgCl2，27mMNaHCO3，O.5mMNa2HPO4，0.5mMKH2PO4，2.1mMCaCl2，pH7.4。动物：标准NaCl，4mMKCl，1.5mMCaCl2，28mM乳酸纳）；3　12％polyHb溶液：12％polyHb溶于生理透析液而成；4　6％polyHb溶液：6％polyHb溶于生理透析液而成；5　12％polyHb+GSH溶液：12%polyHb溶液中加入4mMGSH。方法：一

7、、血液替代品的制备：1　用乙醇醛聚合牛Hb。2　牛Hb聚合程度的检测：（1）不连续密度梯度SDS-PAGE。（2）HPLC检测：取少量聚合产物，用洗脱液稀释成1mg／ml，于PERKINELMER235／200Hplc仪（色谱柱为TSK-GELG4，OOOSpH7.4磷酸盐冲液，含0.1MNaCl；流速：O.5ml／min；紫外检测波长；280nm；进样体积：10ml。3　用5A血液透析器将聚合产物中大于1000kD的成分除去，用100KD膜堆去除聚合产物中小于100kD的成分，同时用生理透析液进行平衡。4　氧亲和力和Hb合量分析：用ABL520血气分

8、析仪检测。5　透析结束后的polyHb溶液的粘度测定：取透析后的12％polyHb溶液，用KJ