乙肝后肝硬化患者血清代谢组的核磁共振氢谱研究

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1、乙肝后肝硬化患者血清代谢组的核磁共振氢谱研究作者：杨永霞,杨生义，梁敏锋，丘翠环,张薇,许静芬【摘要】目的应用核磁共振氢谱(1Hnuclearmagicresonance,1HNMR)和主成分分析(principalponentanalysis,PCA)方法研究乙肝后肝硬化患者血清的代谢组变化。方法慢性乙肝患者血清20例和乙肝后肝硬化患者血清18例，采用BRUKERAvance500MHz超导核磁共振波谱仪进行检测，并运用模式识别方法分析乙肝后肝硬化患者血清代谢组变化。结果乙肝患者和乙肝后肝硬化患者血清的代谢组具有明显的差异。肝硬化引起血清中的脂和胆碱/磷酸胆碱降

2、低，而乳酸、丙氨酸、甲硫氨酸、谷氨酰胺、肌酸以及葡萄糖的含量升高。结论通过上述代谢物的变化可以区分乙肝和乙肝后肝硬化患者。这种基于磁共振氢谱和主成分分析的代谢组学方法可以为肝硬化的诊断提供可靠的分子水平上的代谢依据。【关键词】磁共振氢谱;肝硬化;代谢;主成分分析Abstract:Objective1HNuclearmagicresonance(1HNMR)spectroscopyinconjunctionployedtocharacterizethemetabolitepositionoftheserumsamplesfromthepatientseasuredf

3、orserumsamplesfrom20patientsetabonomicchanges.ResultsThereetabonomicdifferencesbetethionine,glutamine,creatineandglucose.ConclusionTheresultsshoetabolitechangesofserumfromthepatientsarkedlydifferentfromthoseofthepatientsetabonomictechniquecouldprovideanefficienttoolforthediagnosisofpo

4、sthepatiticcirrhosisatmolecularlevel.　　Keyagicresonance;posthepatiticcirrhosis;metabonomics;principalponentanalysis　核磁共振1H谱(1Hnuclearmagicresonance，1HNMR)是研究生物样品(如生物组织/尿液/血液/组织提取液等)代谢组变化的一种很重要的手段,而且这种方法具有良好的客观性和可重复性，无需对样品进行特殊处理,可以实现对整个代谢组的同步检测。肝硬化是影响人类健康的主要疾病之一，慢性乙肝若不能有效控制，可发展为肝硬化，如果能

5、在肝硬化出现早期准确诊断，则会在很大程度上改善肝病的预后[1]。本研究采用磁共振1H谱来研究乙肝后肝硬化患者血清的代谢组特征，结合模式识别分析方法，找出肝硬化出现后代谢组的改变，评价磁共振氢谱用于乙肝后肝硬化诊断的临床应用价值。　　1材料和方法　　1.1样品收集收集南方医科大学南方医院感染内科患者血清样本38例(根据临床乙肝和乙肝后肝硬化诊断标准[2]，慢性乙肝20例,乙肝后肝硬化18例)，置-80℃冰箱贮存备用。　　1.2样品预处理1HNMR谱采样前，将所有血清样本解冻，在4℃下，10000g离心10min。取300μL上层血清加至5mmNMR测试管中，后加入0

6、.2mol/L磷酸缓冲溶液(0.2mol/LNa2HPO40.2mol/LNaH2PO4，pH=7.4)200μL和重水50μL，振荡混匀。　　1.3NMR实验NMR实验采用BRUKERAvance500MHz超导核磁共振波谱仪，实验温度为298K。采用CarrPurcellMEiboomGill(CPMG，relaxationdelay90(τ180τ)nacquisition)脉冲序列，回波时间2nτ=100ms，4s延迟时间，10kHz谱宽，64k数据点，采集次数为128。傅立叶变化前加0.3Hz指数窗函数处理。采用TOPSPIN2.0软件

7、进行手动调相和基线校正。化学位移以乳酸甲基双重峰δ1.33进行定标。　　1.41HNMR谱的数据预处理和主成分分析采用软件TOPSPIN2.0对所有1HCPMG谱进行自动积分，积分区间δ0.5～9.0，积分间隔0.02ppm。为了消除剩余水峰引起的影响，将积分区间δ4.7～5.2的积分值设为零。此外，为了消除样本间因浓度不同而带来的分析误差，在进行主成分分析之前对各分段积分值进行归一化处理。归一化后的数值将作为原始数据导入软件SIMCAP10.0(Umetrics,S)、缬氨酸(valine，0.99ppm、1.04ppm)、乳酸(lactate，1.33ppm

8、、4.12