血管性痴呆大鼠psd95变化机制的研究

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1、血管性痴呆大鼠PSD95变化机制的研究【摘要】目的研究血管性痴呆(VD)大鼠形成过程中突触后致密物质95(PSD95)的变化规律及作用机制。方法永久性结扎双侧颈总动脉制备VD大鼠模型，用Morris水迷宫衡量大鼠的学习记忆水平，用免疫组化法检测大鼠海马PSD95的表达。结果随术后缺血时间延长，VD大鼠的学习记忆能力下降，术后4l/kg)腹腔注射麻醉，保证手术期间有自主呼吸。仰卧固定，颈前部去毛消毒后沿颈正中切开，分离出双侧颈总动脉，双重丝线结扎，中间离断，建立VD大鼠动物模型。假手术组大鼠除不结扎颈总动脉外，麻醉方法及手术过程均与模型组相同。　　1.3检测指标及方法　　1.3.1行为学检测采

2、用中国医学科学院生产的Morris水迷宫，以搜索持续时间(逃避潜伏期)和跨越平台次数作为衡量大鼠记忆功能的标准，检测大鼠术前及术后不同时间内水迷宫学习成绩。　　1.3.2脑组织病理标本制备各组动物分别于相应的时间点深麻下开胸，先后分别用4℃生理盐水(200ml/鼠)、4℃4%多聚甲醛(500ml/鼠，PBS配制，pH7.4)经左心室冲洗和灌注固定，灌毕取脑，4℃后固定过夜。常规乙醇脱水，二甲苯透明，浸蜡包埋，连续切片，厚度为5μm。　　1.3.3PSD95免疫组织化学染色采用SP染色法检测组织PSD95的表达，一抗为小鼠抗大鼠PSD95单克隆抗体(效价1∶300，Stressgen公司)，二抗

3、羊抗小鼠IgG(福州迈新生物技术有限公司，效价1∶1000)。用PBS代替一抗做阴性对照。按SP免疫组化染色试剂盒(福州迈新生物技术有限公司)说明书操作，DAB显色系统闭光显色后光镜观察，阳性表现为神经细胞胞浆及胞膜上呈棕黄色。　　1.3.4图像分析在光学显微镜下观察每一组动物海马区，每只大鼠相同部位连续取10张片子，分别选择5个不重复视野进行观察，测出每高倍视野组织切片的阳性细胞数，所得数据计算其均值，再计算每组平均值。　　1.4统计学分析所得计量资料数据用x±s表示，采用方差分析及t检验进行统计学处理。　　2结果　　2.1大鼠行为学检测结果所有大鼠在术前均行Morris水迷宫测试，确定各大

4、鼠间无明显智能差异，符合标准。术后1d及3d的大鼠因其一般状态较差未行水迷宫测试，其余6个时间点均再次检测了水迷宫成绩，发现随缺血时间的延长，大鼠游迷宫时间逐渐增加，跨越平台次数逐渐减少，术后第4、8、12、16周组与假手术组比较均有显著性差异(P<0.01)(表1)。　　2.2海马区组织学改变常规HE染色显示，假手术组大鼠海马区神经细胞形态及分布正常。手术组术后1d海马CA1区锥体细胞形态及数量未见明显变化;术后3d海马CA1区锥体细胞间隙增大，部份胞核深染，并可见细胞体积缩小，核固缩、破裂;术后7d海马CA1区锥体细胞排列不规则，数量减少，细胞界限不清;术后2.　　3讨论　　PSD9

5、5是新近在谷氨酸能突触的突触后致密物质中发现的一种特殊蛋白质，因聚丙烯酰胺凝胶电泳的分子量为90～95kD而命名为PSD95。PSD95本身并无蛋白酶活性，但它能够介导蛋白质间的相互作用，并特异性的与靶蛋白结合，使PSD95在N甲基D天冬氨酸受体(NmethylDasparticacidreceptor，NMDAR)和突触膜表面蛋白之间起中介作用，在突触水平对兴奋性信号转导进行整合。已知NMDAR参与了海马CA1区长时程增强(longtermpotentiation,LTP)等突触可塑性诱导及学习和记忆机制，而研究发现，PSD95在此过程中具有关键性作用。敲除PSD95基因的小鼠会

6、出现LTP诱导障碍及学习和记忆能力下降。然而，在缺血缺氧时，抑制PSD95的表达或PSD95与NMDAR的结合则对兴奋性毒性和缺血性脑损伤有保护作用〔5〕。因此，PSD95的调控作用对突触功能和神经元的存活均有明显的作用。　　在本实验中，双侧颈总动脉永久性结扎术后，PSD95显示出先升后降的变化规律，于术后3d开始升高，术后2entinmaturationofexcitatorysynapses〔J〕.Science，2000;290(5495)：13648.　　2LinCS，TaoPL，JongYJ,etal.Prenatalmorphinealtersthesynapticplexofp

7、ostsynapticdensity95ethyldaspartatereceptorsubunitinhippocampalCA1subregionofratoffspringleadingtolongtermcognitivedeficits〔J〕.Neuroscience，2009;158(4):132637.　　3DuCP，GaoJ，TaiJM,etal.Increasedtyro