藤梨根正丁醇提取物对人食管癌细胞生长作用的实验研究

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1、藤梨根正丁醇提取物对人食管癌细胞生长作用的实验研究作者：张丽，国宏莉，田林，曹书芬，度长海[摘要]目的:探讨藤梨根正丁醇提取物对培养的人食管癌Eca-109细胞的生长抑制作用。方法:MTT比色法检测藤梨根正丁醇提取物在不同浓度(1μg/ml、10μg/ml、100μg/ml)及不同时间(24h、48h、72h)对Eca-109细胞生长抑制作用，TUNEL法检测其对癌细胞生长的诱导凋亡效应。结果:①藤梨根正丁醇提取物对人食管癌Eca-109细胞的生长抑制作用随着药物浓度的升高和作用时间的延长而增强。②提取物对瘤细胞有明显的凋亡效应。结论:藤梨根正丁醇提取物能有效抑制人

2、食管癌Eca-109细胞生长。　　[关键词]藤梨根/猕猴桃根；食管肿瘤；抑制；凋亡　　Abstract:ObjectiveToevaluatetheinhibitoryeffectofextractsfromActinidiaargutabyn-butylalcoholonhumancarcinomaofesophaguscells(Eca-109).MethodsMTTcolormetricassayinethegroActinidiaargutabyn-butylalcoholonEca-109cells,TUNELtestedtoobservetheapopt

3、osisinducedbytheextracts(1μg/ml、10μg/ml、100μg/ml)onEca-109cells.Results①TheinhibitoryeffectoftheextractsonEca-109cellse-dependentmanner.②TheextractscouldsignificantlyinduceapoptosisofEca-109cells.ConclusionTheextractsfromActinidiaargutabyn-butylalcoholcouldeffectivelyinhibitEca-109cell

4、groor;Inhibitoryeffect;Apoptosis　　细胞凋亡是由基因编码控制的一种细胞的程序性死亡，是机体维持正常生理活动所必需的。近年发现细胞凋亡在许多疾病尤其在肿瘤的发生、发展及转归中起着重要作用，这为肿瘤病人的治疗提供了新的思路。随着中医药对肿瘤治疗的大量临床观察及实验研究的深入,人们逐渐肯定了它对肿瘤治疗方面的疗效。其抗肿瘤作用机制有多方面，如抑制细胞增殖，诱导细胞凋亡，抑制蛋白酪氨酸激酶（protEintyrosinekinase,PTK）活性等[1-4]。藤梨根又称阳桃根，为植物猕猴桃科藤梨（软枣猕猴桃）Actinidiaarg-uta(

5、Sieb.teZucc.)Planch.或猕猴桃A.chinensisPlanch.的根。研究表明，藤梨根对多种肿瘤细胞有生长抑制作用，采用不同方法所得的提取物其抑制作用存在一定的差异[5-6]。本文通过观察藤梨根对培养的人食管癌Eca-109细胞生长的作用，以探讨藤梨根对人食管癌细胞的作用机制。　　1材料与方法　　1.1材料人食管癌细胞Eca-109细胞株购于上海市中科院细胞库，RPMI-1640培养基购于武汉天源生物技术有限公司，为Gibco公司产品(货号31800-022)；超级新生牛血清为杭州四季青生物工程有限公司产品(批号050126)；实验用1∶250胰

6、酶购于武汉天源生物技术有限公司，为Difco公司产品(批号020411)；四甲基偶氢唑蓝(MTT)购于武汉天源生物技术有限公司，为Duchefa分装(货号BS0880)；二甲亚砜(DMSO)购于武汉天源生物技术有限公司，为Sigma公司产品。TUNEL试剂盒(编号ZK-8005)购于北京中杉生物技术有限公司。　　1.2细胞培养细胞在含10%小牛血清的RPMI1640培养液中，37℃、5%CO2条件下培养，24h换液一次。　　1.3药物制备将藤梨根1kg粉碎成粗粉，烘干备用。取藤梨根500g，加入3000ml正丁醇中浸泡12h；回流提取1h，过滤；药渣再加2000ml

7、正丁醇回流提取1h；合并两次滤液，减压回收正丁醇至稠膏状，真空干燥；干燥品加蒸馏水500ml，旋转加热溶解，制成饱和水溶液；灭菌；原液(500ml，1g/ml，pH=3.8)。将原液稀释成1μg/ml、10μg/ml、100μg/ml三个药物浓度；过滤；灭菌；分装，置4℃冰箱备用。　　1.4MTT法将贴壁细胞用0.25%的胰蛋白酶消化后计数，调整细胞浓度为4×104/ml，接种于96孔板，待24h细胞贴壁后加入藤梨根正丁醇提取物药液。实验组分别加入终浓度为1μg/ml、10μg/ml、100μg/ml3个药物浓度的药液，对照组加入等体积溶剂的培养液，每组l2复孔