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时间:2018-05-04
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1、试剂红细胞的研究与应用[摘要]目的:研制试剂红细胞用于血型鉴定反定型,保证临床输血安全。方法:制备效期长的红细胞保养液,再用该保养液制备4%的试剂红细胞,2℃~8℃冰箱保存,每周对其进行红细胞抗原性和免疫特异性测定及反定型试验,观察细胞凝集状况。结果:本法制备的试剂红细胞保存期为68d,具有较好的抗原特异性和细胞稳定性,68d以后凝集强度减弱。结论:该试剂红细胞凝集效能良好,红细胞抗原稳定性、免疫特异性好,具有成本低,制作易,操作简便等优点。 [关键词]试剂红细胞;细胞稳定性;免疫特异性;反定型 StudyandApplicationoftheReagentRedBloodCe
2、lls CHENBolun,ZHAOHeping,SUNLishan,unologicalspecificityanddosomereversetypingexperimentsoftherdecellsethodmunologicalspecificityandthestableantigenoftheredcellsisgood.Atthesametimethismethodhavemanyadvantages,suchastheeasymethodandoperation,thecheaperexpenseandsoon. Keymunologicalspec
3、ificity;Reversetyping 临床输血用于血型反定型的试剂红细胞购置较困难,且保存期、运输等问题常常影响工作,自制的试剂红细胞效期短,红细胞抗原稳定性和免疫特异性及凝集效能不能保证,导致血型鉴定错误,甚至出现溶血性输血反应。笔者探索了一种效期长的红细胞保养液,并制备出试剂红细胞,2℃~8℃保存期达68d,具有良好的细胞稳定性和免疫特异性。 1 材料与方法 1.1 红细胞保养液 枸橼酸0.66g、枸椽酸钠5.48g、磷酸二氢钠2.22g、腺嘌呤0.26g、肌苷0.22g、甘露醇7.5g、葡萄糖19.9g、氯化钠8.35g、EDTA2NA120mg、叠氮钠40m
4、g、防腐防霉剂400mg、稳定剂适量、水加至1000ml,用3%碳酸钠调至pH7.2~7.4,高压灭菌。 1.2 仪器 净化工作台、离心机。 1.3 试剂 单克隆抗A、抗B血型定型试剂,由长春博德生物工程有限公司提供,批号:20060223,质量控制符合要求,在有效期内使用。 1.4 人源抗A、抗B、抗AB血清 均由3个同型人全血等到量混合,分离血清而成,无不规则抗体。 1.5 4%试剂红细胞 分别将3个A型、B型、O型抗凝血液等量混合,离心,吸出上层血浆,沉淀用生理盐水2000r/min离心10min,重复2次,用红细胞保养液配成4%的A型、B型、O型试剂
5、红细胞,置2℃~8℃冰箱保存。 1.6 试剂红细胞抗原性测定 用单克隆抗A、抗B血清分别与试剂红细胞作凝集试验,观察凝集状况,凝集强度以4+、3+、2+、1+、-表示;从试剂红细胞制备之日起每周做细胞抗原性测定。 1.7 试剂红细胞特异性测定 用人源抗A、抗B、抗AB血清分别与制备的试剂红细胞作凝集试验,观察其凝集强度,记录结果;从试剂制备之日起每周做1次细胞特异性试验。 1.8 对1263例体检者用各型试剂红细胞及单克隆抗A、抗B血清做ABO血型反正鉴定,对比检测结果。 1.9 将制备的A型、B型、O型试剂红细胞赠送给西安市辖区83所(三级11所、二级
6、60所、一级12所)医院临床应用,定期反馈结果。 2 结果 2.1 ABO试剂红细胞稳定性测定结果 本法制备的各型试剂红细胞与相对应的抗血清发生特异性凝集反应,与不对应的抗血清均无凝集;ABO试剂红细胞保存至68天时凝集效价降低。 2.2 ABO试剂红细胞特异性结果 各型试剂红细胞只与对应人源抗A、抗B、抗AB血清发生凝集反应,与人源抗A、抗B、抗AB血清的凝集反应效价至62天时不变,63天时凝集强度降低,68天时明显降低。 2.3 1263例体检者ABO血型正反鉴定结果一致 见表1。 表1 1263例体检者ABO血型正反鉴定结果(略) 2.4 西安
7、市辖区83所医院应用本法制备的试剂红细胞后反馈效果良好,与正定型结果一致。 3 讨论 为临床输血安全,在输血前进行血型鉴定时,用已知抗体(抗A、抗B血清)查红细胞表面抗原成分(正定型)和用已知抗原(试剂红细胞)来查血清中的抗体成分(反定型),只有正、反定型结果一致的情况下,才能正确判断ABO血型;由于患者多次输血及妊娠等原因而自身产生许多有临床意义的抗体,必须用谱细胞(多抗原的细胞组)进行抗体筛查和鉴定,才能保证输血安全,然而用于血型反定型的试
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