阿司匹林与华法林联用在大鼠体内的药效学研究

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1、阿司匹林与华法林联用在大鼠体内的药效学研究　　【摘要】目的：研究阿司匹林与华法林联用在大鼠体内的疗效。方法：取成年SD雄性大鼠60只，体重180-200g之间，随机分为三组：空白组、单用华法林组、阿司匹林与华法林联用组。三组均灌胃7天，空白组灌服生理盐水，单用华法林组灌服华法林（0.2mg/kg），联用组灌服阿司匹林（10mg/kg）+华法林（0.2mg/kg）。七天后腹主动脉采血法测定三个药效学指标：血小板聚集抑制率、凝血酶原时间和国际标准化比值、血小板胞内[Ca2+]i。结果：SD大鼠灌胃7天后腹主动脉采血测定，血小板聚集功能：空白组血小板聚集抑制率0.5%，单用

2、华法林组血小板聚集抑制率23%，阿司匹林+华法林组血小板聚集抑制率68%，三组比较差异有统计学意义，P　　【关键词】阿司匹林华法林联用　　1资料与方法　　1.1一般资料　　取成年SD雄性大鼠60只，体重180-200g之间，随机分为三组：空白组、单用华法林组、阿司匹林与华法林联用组。　　1.2方法　　三组均灌胃7天，空白组灌服生理盐水，单用华法林组灌服华法林（0.2mg/kg）），联用组灌服阿司匹林（10mg/kg）+华法林（0.2mg/kg）。七天后腹主动脉采血法测定三个药效学指标：血小板聚集抑制率、凝血酶原时间和国际标准化比值、血小板胞内[Ca2+]i。　　1.2

3、.1血小板聚集功能　　（1）富血小板血浆（PRP）和贫血小板血浆（PPP）的制备。将灌胃后大鼠抽血于3.8%枸橼酸钠抗凝管内，800rpm离心6min得上清液即为富血小板血浆（platelet-richplasma，PRP），剩余血液继续离心2000rpm×10min得贫血小板血浆（platelet-poorplasma，PPP），用PPP调PRP血小板数为3×108/ml。　　（2）Born比浊法测定血小板聚集功能于比浊管内加入500μlPPP调零（100%），同样取500μlPRP，放入另一比浊管中，37℃预热2min，加入诱导剂ADP，在电磁搅拌下观察并记录5m

4、in内血小板聚集情况，记录血小板最大聚集率。按公式计算聚集抑制率：血小板聚集抑制率（%）=（对照组血小板聚集率―给药组血小板聚集率）/正常对照血小板聚集率×100%。　　1.2.2凝血酶原时间的测定和国际标准化比值的计算　　将冷冻保存的血浆解冻，取0.1mL，37℃水浴预热3分钟，迅速加入预热的PT试剂0.2mL，混匀后立即计时，记录凝血丝出现的时间，每个血样重复测定两次，两次测定差值应在2S之内，取平均值，即为PT值。另取未用药大鼠6只，测得其血浆PT值的均值为s，作为正常值（PTnor），与用药大鼠的PT实验值（PTexp）一同用于INR的计算：INR=（PTex

5、p/PTnor）ISI，其中ISI（InternationalSensitiveIndex）为国际敏感度指数，其值为1.85。　　1.2.3血小板胞内[Ca2+]i测定　　（1）洗涤血小板悬液的制备。取1.1项方法制备的PRP，加1/4体积的ACD缓冲液（44mM枸橼酸钠，20mM柠檬酸，74mM葡萄糖，pH5.0），离心得片状沉淀，用洗涤液（113mMNaCl，4mMKCl，24mMNaH2PO4，4mMNa2HPO4，0.2mMEGTA，0.1%葡萄糖，pH6.1）洗涤，离心1500rpm×10min，Hepes-Tyrode液（134mMNaCl，12mMNaH

6、CO3，0.34mMNaH2PO4，2.9mMKCl，1mMCaCl2，0.8mMMgCl2，5mMHEPES，5mM葡萄糖pH7.4）悬浮，调整血小板密度为2×108/ml。　　（2）负载血小板悬液（Fura-2plateletsupension，FPS）的制备。将血小板悬液加入Fura-2/AM（荧光染料），使其终浓度为5μM，37℃恒温避光温育45min，使Fura-2/AM载入细胞内，将已负载的血小板悬液离心2000rpm×10min，去掉上清液，用洗涤液洗涤2遍后用Hepes-Tyrode液重新悬浮。调整血小板数至2×108/ml，测定荧光强度。　　（3）血

7、小板胞内[Ca2+]i测定。应用岛津RF-5301PC荧光分光光度计作波长扫描，发射波长（Em）于500nm，扫描负载血小板悬液的激发波长，如激发波长（Ex）波峰由380nm移至340nm，表明Fura-2/AM已负载酯解进入细胞内，可作[Ca2+]i荧光测定。测定时Em为500nm（波宽10nm），Ex分别为340nm和380n（波宽5nm），波?L变换时间间隔为2s。按以上参数执行双波长测定，测定分组：分为静息态和激活态（加入PAF，终浓度0.75ug/ml），静息态和激活态均包括0.9%氯化钠注射液组（NS组）和给药组。应用荧光比值法连续描记静