抗坏血酸有机锗倍半氧化物抑制鸡胚尿囊膜血管生成作用的研究

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1、抗坏血酸有机锗倍半氧化物抑制鸡胚尿囊膜血管生成作用的研究作者：陈芳闫静郭冷秋贾桂芝张基庆【摘要】目的研究抗坏血酸有机锗倍半氧化物对鸡胚尿囊膜(CAM)血管生成的抑制作用。方法在七日龄CAM上植入含不同剂量试药的甲基纤维素膜片，并孵化48h。解剖显微镜下计数加药组和对照组局部血管数，以此来反映试药对CAM新生血管形成的影响。结果抗坏血酸有机锗倍半氧化物2.5，1.5，0.5mg/egg剂量相关性减少CAM局部的血管数。结论抗坏血酸有机锗倍半氧化物对CAM新生血管有显著的抑制作用。【关键词】抗坏血酸有机锗倍半氧化物鸡胚尿囊膜(CAM)

2、抗血管生成Abstract：ObjectiveToinvestigatetheantiangiogenesiseffectoftheascorbicAcidSesquioxyGe(Ⅳ)onchickenembryochorioallantoicmembrane(CAM).MethodsTheascorbicacidSesquioxyGe(Ⅳ)loadedethylcellulosemembraneseasuredunderdissectionmicroscope.TheinhibitoryeffectonCAMangiogenes

3、isg/eggand0.5mg/eggdose-dependentlydecreasedthedensityoflocalbloodvessels.ConclusionAscorbicacidSesquioxyGe(Ⅳ)significantlyinhibitschickenCAMangiogenesis.Keybryochorioallantoicmembrane(CAM);Antiangiogenesis肿瘤生长和转移与新生血管的形成密切相关。临床与动物实验证明，当肿瘤组织生长超过2mm3时，如果没有新生血管供应充足的氧气和营

4、养物质，肿瘤组织将保持静止或发生退化。近年来,有研究发现某些化疗药物,在小剂量、高频率的给药方式下可以选择性地显著抑制肿瘤组织内新生血管内皮细胞的生长,使肿瘤细胞因为血供不足而生长受阻。这种特殊的给药模式,化疗药物的作用靶位已经不是肿瘤细胞,而是新生的血管内皮细胞,这就称为小剂量化疗(metronomicchemotherapy)或抗血管生成化疗(antiangiogenicchemotherapy)［1，2］。因此新生血管生成是肿瘤生长和扩散的必要条件，抑制肿瘤血管的生成可以使肿瘤因缺氧、缺血而部分死亡，从而延缓肿瘤生长和抑制肿

5、瘤转移［3］。开展抑制肿瘤血管的药物筛选研究目前已成为抗肿瘤研究的热点。有机锗化合物是人们熟知的具有广谱生物活性的有机化合物，特别是它的抗癌活性研究已引起人们的极大兴趣［4，5］。抗坏血酸有机锗倍半氧化物是本实验室研制合成的一种新型有机锗化合物，经动物肿瘤抑制实验证明，该化合物具有显著的抗肿瘤活性。鸡胚尿囊膜(CAM)是研究体内血管发生的常用模型之一［6，7］。本研究应用CAM技术，观察了抗坏血酸有机锗倍半氧化物对CAM血管生成的影响，从抗血管生成途径对抗坏血酸有机锗倍半氧化物的抗癌作用机制进行了初步探讨。1材料与仪器1.1动物与

6、材料昆明种小鼠,体重(20±2)g,由黑龙江中医药大学实验动物中心提供。小鼠S180腹水型瘤株由哈尔滨肿瘤医院实验动物中心提供。受精种蛋购于东北农业大学孵化场。1.2试剂甲基纤维素（M450，英国进口分装，北京索莱宝科技有限公司哈尔滨分公司），丙酮（天津市化学试剂六厂三分厂），甲醇（北京化工厂），双蒸水（哈尔滨蒸馏水厂），新洁尔灭（齐齐哈尔市鹤城化学药物有限责任公司）。1.3仪器与设备恒温恒湿箱（SPX-250型，上海博迅实业有限公司医疗设备厂），解剖镜（BA400/500型，麦克奥迪实业有限公司），净化工作台（S）血管生成的实验

7、2.2.1鸡胚的处理取重量相近（50±5）g，表面无污染、无破损，产出时间在1周以内的新鲜受精鸡卵，以0.1%新洁尔灭清洗，再用清水洗净后用纱布拭干。气室朝上，鸡蛋长轴与蛋托成约60°角，放在温度38℃,相对湿度60%的孵箱内孵育,内置盛有0.1%新洁尔灭的湿盘，每天早晚各翻蛋1次。2.2.2甲基纤维素膜片制备用双蒸水配制浓度为0.5%的甲基纤维素溶液，过夜使甲基纤维素充分溶解，高压灭菌后备用。在超净台下将甲基纤维素溶液20μl分多次重复加入同一凹槽内，超净台内吹干，制成直径约4mm的膜。将膜片轻轻揭下，无菌保存备用（最好在24h

8、内使用）。2.2.3开窗加药孵育至第7天，将鸡胚随机分成4组：高剂量实验组（2.5mg/egg）［9］、中剂量实验组（1.5mg/egg）、低剂量实验组（0.5mg/egg）、空白对照组（甲基纤维素膜片）。在照蛋器指示下距胚头右下方1.0cm处做标