去细胞肌肉组织工程支架与人羊膜上皮细胞的相容性研究

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1、去细胞肌肉组织工程支架与人羊膜上皮细胞的相容性研究作者：薛辉陈东刘佳梅刘颖孟晓婷殷迪【摘要】目的制作去细胞肌肉组织工程支架，并检测其与人羊膜上皮细胞的生物相容性。方法采用三硝基甲苯和十二烷基磺酸钠结合的化学萃取方法制作去细胞肌肉组织工程支架，冰冻切片观察其结构。将人羊膜上皮细胞种入支架培养7d后，用免疫组化检测羊膜上皮细胞的增殖活性、NT3及BDNF的表达,扫描电子显微镜观察其超微结构。结果支架中细胞去除完全，其主要结构为平行排列的管状结构。细胞外基质的主要成分弹性纤维和胶原纤维保持完好。羊膜上皮细胞在支架里有增殖活性，并呈现NT3、BDNF免疫反应阳性

2、。扫描电镜显示，羊膜上皮细胞在支架中分布均匀，生长良好。结论成功的制作了去细胞肌肉组织工程支架，其与人羊膜上皮细胞有良好的相容性。【关键词】去细胞肌肉;人羊膜上皮细胞;生物相容性　　【Abstract】ObjectiveToproducetheacellularmuscleasbiomaterialscaffoldandtoobserveitsbiopatibilityanamnioticepithelialcell.　MethodsTheacellularmusclescaffoldsadebyextractiondodecylsulfate.Thehis

3、tologicalstructureofacellularmuscleanamnioticcellsplantedintoacellularmusclescaffolds.Aftercultured1munohistochemicalstainingedtoobservetheproliferatingcapacityandtheexpressionsofNT3andBDNFofamnioticcellsinscaffold.SEMedtoexaminethedistributionofhumanamnioticepithelialcellsgrouscl

4、ehadbeenextracted.ThescaffoldofacellularmuscleanamnioncellscouldproliferateandsynthesizeNT3andBDNF.Scanningelectronmicroscopydemonstratedauniformdistributionofcellsinscaffold.　ConclusionsThecellsinratskeletalmusclearesuccessfullyremovedbychemicalextraction.Theacellularmusclescaffo

5、ldmadeinthisanamnioticcells.　　【Keyuscle;Humanamnioticcell;Biopatibility　　近年来组织工程研究的重要进展之一就是采用自体或异体移植物制作天然生物降解材料的组织工程支架。其中去细胞移植物与机体有良好的生物相容性。去细胞肌肉支架可作为生物工程支架支持神经细胞轴突再生。Mligiliche等〔1〕把去细胞肌肉移植入大鼠坐骨神经缺损处,4arker公司;神经营养素(NT)3,脑源性神经营养因子(BDNF)兔抗人多克隆抗体购自武汉博士德公司，SABC免疫组化试剂盒购自福州迈新生物公司。人羊膜上皮细

6、胞株为本实验室保存。　　1.2方法　　1.2.1去细胞肌肉支架的制备参考Broin摇48h后,转入3%的TritonX100溶液,摇床中37℃、50r/min摇48h。然后放入蒸馏水中，摇床37℃、50r/min摇48h。换成1%SDS溶液，摇床37℃，50r/min摇48h。PBS洗24h。PBS中4℃保存备用。　　1.2.2支架形态结构的观察及成分鉴定肉眼观察去细胞肌肉的形态。去细胞肌肉用4%多聚甲醛PBS固定1h，5%蔗糖90min，15%蔗糖90min，30%蔗糖过夜以梯度脱水，OCT包埋，冷丙酮速冻，之后放入-70℃冰箱保存。恒冷箱切片机切片，H

7、E染色，观察其内部结构。此外对切片进行VanGienson(VG)染色和EM培养液中(含10%胎牛血清，100U/ml青霉素，100mg/ml链霉素，200μg/ml的谷氨酰胺)，37℃、5%CO2及饱和湿度条件下的细胞培养箱中培养，隔天换液，待单层培养细胞生长至80%汇合后，传代培养。　　1.2.4人羊膜上皮细胞与去细胞肌肉支架相容性的鉴定　　1.2.4.1取生长良好的人羊膜上皮细胞，80%细胞接近融合，弃去培养液，0.25%胰蛋白酶消化，当胞体回缩，细胞间隙变宽时，用血清终止消化，反复轻吹瓶壁细胞，制成单细胞悬液于离心管中，1000r/min，离心3mi

8、n。用DMEM重悬细胞。用1ml注射器吸入细胞悬液，