姜黄素、姜黄素与大黄素联用抗肝纤维化作用的实验研究

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1、姜黄素、姜黄素与大黄素联用抗肝纤维化作用的实验研究【摘要】目的探讨姜黄素、姜黄素与大黄素联用的抗肝纤维化作用。方法以二甲基亚硝胺（DMN）诱导大鼠肝纤维化模型，造模结束后，分别给予姜黄素、姜黄素与大黄素联用（简称姜大联用）进行治疗，检测肝功能、肝纤维化血清学指标，肝组织SOD、MDA和Hyp水平，取肝组织固定，HE、VG胶原染色，光镜观察肝组织的病理变化以及α-平滑肌（α-SMA）在肝脏的表达。结果姜黄素、姜大联用能明显降低肝纤维化大鼠血清ALT，AST，TNF-α，HA，LN，PCIII含量，降低肝组织MDA、Hyp含量，升高SOD水

2、平。病理组织观察表明，姜黄素、姜大联用能减轻肝细胞坏死，抑制纤维组织增生，改善肝组织结构，抑制α-SMA在肝内的表达。结论姜黄素、姜大联用具有良好的抗肝纤维化作用。【关键词】姜黄素大黄素肝纤维化姜黄素、大黄素分别是温郁金、姜黄和虎杖的所含成分之一。姜黄素具有广泛的药理活性，能抗氧化、抗炎，抑制肝星状细胞的活化和增殖，而大黄素亦有上述作用。初步研究表明，姜黄素、大黄素能预防肝纤维的形成，以郁金、虎杖为主组成的复方虎金颗粒［1］具有良好的抗肝纤维化作用。为阐明中药复方产生效用的物质基础，我们探讨了姜黄素、姜黄素与大黄素联用对肝纤维化的治疗作

3、用。　　1材料　　1.1动物SPF级SD大鼠，雌雄各半，体重（200±20）g，购自广州中医药大学实验动物中心，普通大鼠饲料喂养。　　1.2药物姜黄素（Curcumin）、大黄素（Emodin），均购自陕西旭煌植物科技有限公司，经HPLC检测纯度达90%以上，使用前用0.5%羧甲基纤维素钠配制成不同浓度的混悬液。水飞蓟素（Silymarin，利加隆140胶囊），德国马博士大药厂生产，临用时用蒸馏水配成2.4mg/ml的供试品液。　　1.3试剂DMN购自日本株式会社，使用前用生理盐水配成0.5%溶液备用。HA，LN，PCIII由北京北方生

4、物技术研究所提供；TNF-α测试盒由北方生物试剂研究所提供；SOD，MDA，Hyp，考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。甲醛、苏木素、伊红、酸性品红、戊二醛等。　　1.4仪器7060型全自动生化分析仪、SN-695B型放免γ测量仪，上海原子核研究所日环仪器厂。UV-754型分光光度计，BX50显微镜，Olympus公司，2035石蜡切片机，德国N原液溶于200ml生理盐水中，配制0.5%DMN溶液，避光保存，2周内使用。参照　　3.5病理组织观察结果　　3.5.1肉眼观察正常对照组大鼠肝脏呈红褐色，表面光滑，质软，颜色

5、正常；模型组大鼠肝萎缩，表面较粗糙，色晦暗，部分肝表面有细小结节，质硬。姜黄素、姜大联用组肝组织略变小，表面欠光滑，质地较韧，颜色偏暗，均较模型组为轻。各组大鼠腹水发生、肝表面颗粒出现情况见表4。　　表4姜黄素、姜大联用对大鼠腹水、肝脏表面颗粒的影响（略）　　从表4可以看出，正常对照组大鼠未见腹水发生，肝脏表面无颗粒形成，模型组大鼠腹水发生率达87.5%，肝表面全部出现颗粒。经姜黄素、姜大联用干预后，二者的发生率均有不同程度的下降。　　3.5.2HE染色观察正常对照组肝小叶结构正常，肝窦无扩张出血，汇管区及中央静脉血管壁清晰可见，管壁无

6、增厚，管周无胶原纤维可见；模型组可见肝结构被破坏，肝小叶结构、肝索排列均紊乱，部分肝细胞肿胀，肝小叶中央区明显坏死，胶原纤维增生显著，部分形成假小叶；水飞蓟素组可见肝小叶样结构较正常，肝细胞体积略增大，有少量纤维组织增生，纤维化程度轻于模型组；姜黄素低剂量治疗组可见肝组织结构有一定的改善，肝小叶中央区可见肝细胞坏死，汇管区炎性细胞部分浸润，有少量纤维组织增生，未见假小叶形成；姜黄素高剂量治疗组肝小叶结构基本完整，炎性反应及坏死减轻，纤维组织增生不明显；姜大联用低剂量组肝组织结构改善较明显，未见肝细胞坏死，汇管区炎性细胞部分浸润，有少量纤

7、维组织增生；姜大联用高剂量治疗组肝小叶结构基本完整，纤维组织增生不明显。　　3.5.3VG染色观察正常对照组肝小叶结构正常，可见极少量胶原纤维主要分布于汇管区和中央静脉周围。模型组肝小叶结构被破坏，肝索排列紊乱，肝小叶被纤维间隔分割，形成大小不等的假小叶，由胶原纤维构成的纤维间隔完全或部分包绕假小叶，肝窦内呈现连续或断续性环状胶原沉积。水飞蓟素组肝小叶正常结构被破坏，界板不完整，间质胶原纤维较少，比模型组程度轻。姜黄素低剂量治疗组：肝内有少量纤维组织增生，未见假小叶形成；姜黄素高剂量治疗组肝组织肝小叶结构基本完整，可见肝汇管区周有纤维组

8、织增生。姜大联用低剂量组肝组织结构改善较明显，有少量纤维组织增生；姜大联用高剂量治疗组肝小叶结构基本完整，有少许纤维组织增生。各组肝胶原增生程度见表5。　　表5姜黄素、姜大联用对大鼠肝纤维组织增生的影响（略