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1、硫辛酸对细胞DNA损伤保护作用的初步研究作者：陈宏莉，海春旭，梁欣，张晓迪，刘瑞【关键词】过氧化氢PreliminaryinvestigationonprotectivefunctionoflipoicacidfromDNAdamage【Abstract】AIM:TothestudydoseeffectrelationshipbetageofHepG2cellsandtheeffectofdifferentconcentrationsofhydrogenperoxide(H2O2)for2hrespectively,and
2、toobservetheprotectivefunctionoflipoicacidfromtheDNAdamageofcellsatthesametime.METHODS:HepG2cellsagegroupandprotectivegroup,thenage.RESULTS:TheDNAdamageofcellsoreseriousomentsignificantlyincreased(P<0.05）.Lipoicacidcouldsignificantlydecreasethetaillength,thetai
3、lDNAcontentandthetailmomentofdamagedcells（P<0.05）.CONCLUSION:H2O2causesDNAdamageofcellsinadoseeffectmanner,agecausedbyH2O2.【Keya公司），其他试剂均为进口或国产分析纯试剂.1.2方法将肝癌细胞株HepG2接种于12孔培养板中，分为对照组、损伤组和保护组3组，当细胞长至80%~90%融合时（约24h）损伤组分别加入H2O2，使其终浓度为0,10,100,500,1000,2000μmol/L，保
4、护组分别加入H2O2和硫辛酸，H2O2的终浓度为500μmol/L，硫辛酸终浓度为37.5μmol/L,37℃培养2h后消化细胞，加入PBS离心两次后，用PBS将细胞浓度调至1×106/L，放置于37℃水浴锅中备用.每组细胞经台盼蓝染色，细胞存活率均大于90%.单细胞凝胶电泳方法参照Singh等［2］方法略加改进后进行.主要步骤①铺片：第一层将正常熔点的琼脂糖凝胶100μL铺于载玻片；第二层将细胞悬液（细胞浓度为1×106/L）50μL和低熔点的琼脂糖凝胶450μL在37℃下混合，每张片子加80μL混合液，4℃放置10mi
5、n；第三层将低熔点的琼脂糖80μL铺于上述片子，4℃放置10min.②裂解：载玻片放入细胞裂解液（2.5mol/LNaCl,10mmol/LTris,100mmol/LNa2EDTA,10mL/L肌氨酸钠,临用前加入10mL/LTritonX100,100mL/LDMSO,pH=10），4℃裂解1.5h.③电泳：载玻片置入新鲜电泳液（300mmol/L乙酸钠，100mmol/LTris,100mmol/LNa2EDTA,pH=10），静置20min，电压15V，电流300mA,电泳1h.④中和、染色：预冷的Tris缓冲液（
6、0.4mmol/L,pH=7.4），中和30min,滴加EB（15mg/L）40μL,加盖玻片，荧光显微镜下观察采集照片.⑤分析：每组各选30个细胞，应用CASP（etassaysoft.2结果2.1H2O2损伤的剂量效应关系随着H2O2浓度的增加，各指标数值逐渐增大（图1，2），对照组与H2O2各剂量组之间尾长、尾部DNA百分含量和尾距差异均有显著性（P<0.025）；H2O2各剂量组之间各指标也具有显著性差异（P<0.025，表1）.图1500μmol/LH2O2处理的细胞×400（略）2.2硫辛酸对H2O
7、2致DNA损伤的保护作用与对照组（单纯H2O2500μmol/L处理2h,图3）相比较，硫辛酸处理组（H2O2500μmol/L，硫辛酸37.5μmol/L处理2h，图4）尾部DNA各指标减小，差异具有显著性（P<0.05，表2）.图21000μmol/LH2O2处理的细胞×400（略）表1H2O2作用2h的HepG2细胞尾部DNA变化（略）aP<0.05vs对照组.图3对照组细胞×400（略）图4硫辛酸处理组×400（略）表2HepG2细胞经H2O2和硫辛酸共同处理后细胞尾部DNA变化（略）vs对照组.3讨论
8、DNA在生物学和医学中起着十分重要的作用，它带有生物信息编码，能够控制多种生物功能，包括蛋白质的合成和遗传的性状等等.自由基能使DNA双链断裂和单链断裂，使DNA的碱基变成自由基，并生成稳定的氧化产物，常态下，细胞每消耗200个分子氧就会产生1分子氧化核酸.因此，体内自由基代谢异常会导致细胞DNA损伤.
