大鼠创伤组织中cgrp，vegf表达的变化及意义

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1、大鼠创伤组织中CGRP，VEGF表达的变化及意义：周建清，王永忠，蒋红艳【摘要】目的：探讨创伤组织中降钙素基因相关肽（CGRP），血管内皮生长因子（VEGF）表达与损伤时间的相关关系。方法：应用免疫组织化学方法、图像分析技术动态检测大鼠创伤组织中CGRP，VEGF的表达。结果：生前创伤组（1，2，4，8，12，24h）大鼠皮肤组织内CGRP在神经纤维中表达明显高于正常对照组（P＜0.05），死亡组大鼠皮肤组织中CGRP表达与正常对照组比较无明显变化（P>0.05）。生前损伤组中CGRP表达在损伤后1h明显增多

2、，4h达到高峰,8h开始下降，以后逐渐恢复到正常。VEGF在损伤后8h皮肤组织中开始表达,72h表达最强(P＜0.01),96h开始下降。结论：损伤组织中CGRP表达明显早于VEGF，而且具有时间的规律性，可作为早期创口损伤时间推断中的重要指标。【关键词】大鼠；降钙素基因相关肽；血管内皮生长因子；免疫组织化学方法［Abstract］Objective:Toinvestigatetherelationshipofthetimeofinjuryandtheexpressionsofcalcitoningenerela

3、tedpeptide(CGRP)andvascularendothelialgromunohistochmistytechniqueandMIASimageanalysissystem.Results：TheexpressionofCGRPinneurofibrilsintheorteminjurygroup,theremounreactivitiesinneurofibrilsparedtothecontrolgroup(P>0.05).Further,theexpressionofCGRPcouldbed

4、etectedincreasinglyin1h,andreachedmaximumin4h,returnedin8h，thenreturnedtonormalthereafter.Hoaximunin72h(P＜0.01),thenreturnedin96h.Conclusion：TheexpressionofCGRPedependent.Itcouldusedasabiomarkertodeterminethetimeofinjuryintheearlymunohistochemistry损伤时间推断是法医实际

5、工作中非常重要的内容，但又一直是困扰法医工的一大难题。中枢及周围神经损伤后可引起中枢及外周部位降钙素基因相关肽(calcitoningenerelatedpeptide，CGRP)的表达变化，而CGRP的表达程度与神经损伤及修复再生的情况有一定的相关性。血管内皮细胞生长因子(vascularendothelialgro做切创，长约5cm，深及筋膜。在相应时间段颈椎脱位法处死大鼠，迅速取下大小为1.5cm×1.5cm伤区组织，置4%低聚甲醛0.1mol/LPBS中，4℃固定。1.2试剂一抗CGRP，VEGF抗体均购

6、自美国Sigma公司；二抗及SABC试剂盒均购自武汉博士德生物技术公司。1.3对照组的设立在本实验中分别设立正常组织对照，远离创区的组织对照（创周5mm以外），不加抗体对照及阳性对照。1.4免疫组化采用链霉素亲和素－生物素－过氧化酶复合物法（SABC）。切片首先用80%甲醇(内含0.3%Ｈ2Ｏ2)于室温处理20min以去除内源性过氧化氢酶,而后用0.3%TritonX100于室温处理20min以增加膜通过性,然后将切片与抗体孵育,所有抗体均用含有0.3%TritonX100和1%正常羊血清白蛋白的磷酸缓冲液稀释

7、。切片首先与一抗兔抗大鼠CGRP抗体(效价为1∶800)在4℃冰箱放置2d,而后分别与二抗(效价1∶500)和ABC复合物在室温条件下孵育4ｈ,以上每一步间隙均用0.01mol/ＬPBS充分洗涤(5min×3次)。最后切片按试剂盒说明书进行染色。使用已知阳性切片做阳性对照，阴性对照用PBS代替一抗。1.5统计学处理各组实验数据用±s表示，应用SPSS11.5软件进行单因素方差分析，两两比较用t检验。2结果2.1CGRP免疫组化观察生前创伤组大鼠皮肤组织中，CGRP在神经纤维内可见多量棕黄色颗粒阳性表达，而且与正常对

8、照组比较明显增多，差异有统计学意义（P＜0.05）。死后损伤组皮肤组织中，CGRP在神经纤维内可见少量棕黄色颗粒弱阳性表达，且与正常对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）。生前创伤组中CGRP表达在损伤后1h明显增多，4h达到高峰,8h开始下降，以后逐渐恢复到正常（图1）。2.2VEGF免疫组化观察正常对照组VEGF在上皮组织基底细胞内可见少量棕黄