表面修饰对纳米晶胶原基骨细胞相容性的影响

《表面修饰对纳米晶胶原基骨细胞相容性的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、表面修饰对纳米晶胶原基骨细胞相容性的影响：马鹏,徐成振,徐晓峰,陈静,龚爱华,张志坚【摘要】目的：探索纤维蛋白(fibrin,FB)修饰的纳米晶胶原基骨(nanoHydroxyapatite/collagen,nHAC)支架材料上成骨诱导的骨髓间充质干细胞(marroesenchymalstemcells,MSCs)黏附、增殖及分化的情况。方法：实验分为两组：实验组，纤维蛋白修饰的纳米晶胶原基骨(FBnHAC)；对照组，单纯的纳米晶胶原基骨(nHAC)。将SD大鼠骨髓间充质干细胞定向诱导为成骨细胞，种植于支架材料上，体外复合培养。通过检测支架材料的细胞黏附率、不同时间点(3，7，10

2、，14d)支架材料中细胞数、碱性磷酸酶表达量以及扫描电镜观察细胞在支架材料上的生长状况，比较分析不同支架材料与细胞生物相容性差异。结果：大鼠MSCs经诱导培养14d后,I型胶原免疫荧光染色为阳性；实验组支架材料的细胞黏附率显著高于对照组(P<0.05)；且相同时间点实验组支架材料中的细胞数及碱性磷酸酶表达量也明显高于对照组(P<0.05)；电镜观察发现两组材料上均有细胞生长,但实验组的细胞生长状况明显好于对照组。结论：表面修饰纤维蛋白后的nHAC支架材料具有更好的细胞黏附、增殖及促成骨分化能力。【关键词】纤维蛋白；修饰；纳米晶胶原基骨；组织工程骨　　［Abstract］Ob

3、jective:NanoHydroxyapatite/collagen(nHAC)modifiedarroesenchymalstemcellsonthescaffoldsSDratbonemarroonstrated,MSCsodifiedentgroup)andmonnHAC(controlgroup).Theadhesiveratesepoints(3,7,10,14d),thenumberofthecellsinthescaffoldsicrograph(SEM).Thedifferencesbetonstratedbythepositivestainingofcollagen

4、typeI.TheefficiencyofcelladhesioninthemodifiednHACodifiednHAC(P<0.05).ThecellnumberandALPactivityofMSCsadheredtonHACmodifiedbyfibrinplematerial(P<0.05).CellscouldbeobservedoneveryscaffoldbySEM,butcellsonthemodifiednHACgreodifiednHAC.Conclusion：nHACmodifiedationability.　　［Keyodification;nan

5、oHydroxyapatite/collagen;tissueengineeredbone　　严重创伤、炎症、肿瘤、先天性畸形等导致的节段性骨缺损是骨科医师面临的临床难题之一。利用组织工程技术构建组织工程骨治疗骨缺损是具有临床应用价值的治疗策略，其中支架材料是构建组织工程骨的关键要素之一，理想的支架材料应有利于种子细胞的黏附、增殖及分化，并在体内能形成生物活性组织。纳米晶胶原基骨（nanoHydroxyapatite/collagen,nHAC）已经作为人工合成生物支架材料替代骨缺损应用于临床［1］，研究表明其复合细胞后具有体内成骨能力［2］。为了进一步提高nHAC的细胞相容性,本研究

6、充分利用纤维蛋白（fibrin,FB）的生物学特性，对nHAC进行表面修饰处理，以促进成骨诱导的骨髓间充质干细胞(marroesenchymalstemcells,MSCs)在nHAC上的黏附、增殖及分化,为骨组织工程提供一种支架材料的表面修饰手段。　　1材料和方法　　1.1动物和试剂　　健康雄性SD大鼠，体质量约100g，由江苏大学动物实验中心提供；纳米晶胶原基骨，由清华大学材料系提供；LDMEM、胎牛血清、胰蛋白酶(Gbico公司)；地塞米松、维生素C、β甘油磷酸钠、纤维蛋白原、Cy3标记的羊抗小鼠IgG、hoechst33342（Sigma公司）；小鼠抗大鼠I型胶原单克隆抗体

7、(SantaCruz公司)；新鲜血浆自制；碱性磷酸酶检测试剂盒(南京建成生物工程研究所)。　　1.2方法　　1.2.1SD大鼠MSCs的获得与成骨诱导颈椎脱臼处死大鼠，无菌条件下取其股骨、胫骨,用含体积分数10%胎牛血清的LDMEM培养液冲洗骨髓腔以冲出骨髓,淋巴细胞分离液分离后，置入含10%胎牛血清、10nmol/L地塞米松、50mg/L维生素C、10mmol/Lβ甘油磷酸钠的LDMEM培养基中,37℃、5%CO2孵箱中培养，3～4d后