ybox结合蛋白1在胃癌组织中的表达及意义

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1、Ybox结合蛋白1在胃癌组织中的表达及意义【关键词】胃癌;Ybox结合蛋白1;免疫组织化学;原位杂交　ABSTRACT:ObjectiveToinvestigatetheexpressionandsignificanceofYboxbindingprotein1(YB1)inpatientsaofdifferentstages.MethodsExpressionsofYB1proteinandmRNAinspecimensofnormaltissues,intestinalmetapla

2、sia,earlygastriccancerandadvancedgastriccancermunohistochemistryandinsituhybridization.ResultsThereRNAinnormalgastrictissues.Houcosainintestinalmetaplasia.YB1ucosaofepithelialcellsintheearlystageofgastriccancer,anditsexpressionayberelatedtotheearlypathog

3、enesisanddevelopmentofgastriccarcinoma.　　KEYHCⅡ类基因的转录[5]。研究表明，YB1可被丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶Akt磷酸化，该磷酸化使得YB1的mRNA5末端的结合力加强，从而使其易位活性增强，这也可能与细胞的增殖和转化相关[6]。　　以上研究均表明，YB1在肿瘤细胞的增殖及肿瘤的发生、进展和预后中均发挥其生物学作用，但其在胃癌中的研究尚未见报道。因此，我们采用免疫组织化学和原位杂交的方法检测了YB1在胃癌组织中的表达情况，以探讨其可能的作用机制。

4、　　1材料与方法　　1.1标本采集收集病理确诊手术切除的胃腺癌标本63例，其中早期胃癌25例，进展期胃癌38例;肠黏膜化生组织23例。以上患者无其他系统性疾病，在术前均未接受放射和化学治疗。21例正常组织来自胃镜活检组织。其中男12例，女9例;35～50岁者12例，51～72岁者9例。胃癌组与正常组的一般情况比较无显著差异性。　　1.2主要试剂YB1多克隆抗体(5μg/mL)为日本学者赠送;原位杂交试剂盒购自武汉博士德生物公司;YB1的探针序列为：5′>GCCGCTGCCCGTAG　　TGCC

5、GGGCTTGGTGTC<3′，地高辛标记，与人类其他基因无同源性。　　1.3方法　　1.3.1YB1的免疫组化定位新鲜胃癌组织于100mL/L的甲醛溶液中固定48h，石蜡包埋;切片经脱蜡、水化后，用30mL/L双氧水孵育10min，以去除组织内固有的过氧化物酶。枸橼酸缓冲液修复抗原：92℃水浴15min，室温冷却1h;血清封闭液、卵白素封闭液和生物素封闭液各孵育15min，以去除非特异性染色。一抗4℃结合21h，二抗孵育40min，辣根过氧化物酶标记的链霉素复合物孵育30min，二氨基联苯胺(D

6、AB)染色，苏木素复染。阴性对照用羊血清代替一抗或二抗。　　1.3.2原位杂交方法参照文献所述[67]，步骤如下：活检组织经固定、包埋、切片、脱蜡、水化后，用30mL/L双氧水(DEPC配制)孵育10min，DEPC水洗6min;蛋白酶K37℃消化30min，以去除阻碍探针结合的表面蛋白;PBS和DEPC各水洗6min;每片加预杂交液20μL，42℃孵育2h;加入13pmol/L的寡核苷酸探针20μL，42℃杂交22h;2×SSC和1×SSC液各洗15min;羊血清封闭液37℃封闭30min，生物素化的

7、鼠抗地高辛37℃孵育30min，辣根过氧化物酶标记的链霉素复合物37℃孵育30min;DAB染色，苏木素复染。阴性对照用预杂交液代替杂交液。阳性判断标准：角质形成细胞中有棕黄色颗粒沉着，阴性无此沉着。　　1.4统计学方法应用SPSS13.0软件进行统计分析。组间两两比较采用卡方检验和精确概率法，以P<0.05为差异有统计学意义。　　Fig.1ExpressionofYB1innormaltissues,intestinalmetaplasiaandgastriccarcinomatissues(D

8、AB,×200)　　A：正常组织中YB1无表达;B：肠化生组织中YB1阳性染色于胃黏膜上皮细胞中，但表达较弱;C：早期胃癌中YB1表达于全层胃黏膜上皮细胞中;D：进展期胃癌中YB1表达弱于早期胃癌。　　2.2YB1mRNA的表达情况mRNA的表达部位同蛋白。在正常组织中，YB1mRNA在胃黏膜上皮细胞中未见表达(图2A);在肠化生组织中，可见YB1mRNA阳性染色于胃黏膜上皮细胞中，但表达较弱，不是所有的细胞均着