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《地龙脱氧核糖核酸酶的部分性质研究及作用初探 》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、地龙脱氧核糖核酸酶的部分性质研究及作用初探 ：樊慧杰 康慧芳 姚建强 王晓媛 杨利军 牛勃【摘要】：目的研究地龙体内两种新型脱氧核糖核酸酶(LDs)的部分生化性质,并对其作用进行初步探索。方法采用Sephacryl-200柱层析、毛细管等电聚焦电泳法、琼脂糖凝胶电泳等方法。结果初步得出LD1、LD2分子量为126、62kDa；确定了等电点分别为6.12、6.05。LD1、LD2对细菌质粒DNA、λDNA均有分解作用。结论地龙中的LDs是一种新型的脱氧核糖核酸酶。明确LDs的分子量、等电点有助于优化LDs的
2、提取工艺以及LDs的进一步研究。对细菌质粒DNA、λDNA的降解提示LDs有可能对抗细菌的耐药性。【关键词】地龙 脱氧核糖核酸酶 分子量 等电点 Abstract：ObjectiveTostudypartialbiochemicalcharacterizationandeffectoflumbricusdornases(LDs).MethodsSephacryl-200columnchromatography,CIEFandagaroseelectrophoresisineLDs.ResultsThem
3、olecularidandλDNA.ConclusionLDsisaneinationofmolecularidandλDNAdegradationimplythatLDscanopposebacteriadrugresistance. Keybricus；dornases；molecularacia；CoomassieBrilliantBlueG250,Fluka；毛细管等电聚焦试剂盒(cIEF3-10Kit)；质粒(pBV220),由本实验室自备；λDNA,Sigma公司产品。其它所用试剂均为分析纯
4、。 1.2主要仪器 GradifracV1.2层析系统,pharamacia公司；毛细管电泳仪：BECKMAN55002。 2实验方法 2.1分子量测定 凝胶过滤层析(分子筛)法：参照文献[4]方法。 2.2等电点测定 毛细管等电聚焦电泳法：参照文献[5]方法。 2.3LDs对质粒的降解作用 取3μL质粒(pBV220),分别加入LD1、LD210μL,37℃反应30min后进行0.8%琼脂糖凝胶电泳,EB染色后分析结果。 2.4LDs对λDNA的降解作用 取2μLλDNA,分别加入L
5、D1、LD210μL,37℃反应30min后进行0.8%琼脂糖凝胶电泳,EB染色后分析结果。 3结果 3.1凝胶过滤层析(分子筛)测定LDs分子量 以标准蛋白质洗脱体积为纵坐标,标准蛋白质分子量的对数为横坐标,绘制标准曲线。根据LD1、LD2的洗脱体积,查标准曲线,并计算出用SephacrylS-200测得LD1、LD2分子量分别为126、62kDa。 3.2LDs等电点的测定结果 毛细管等电聚焦法测定等电点的结果：LD1、LD2等电点分别为6.12、6.05。 3.3LDs对质粒(pBV220
6、)的降解作用(见图1) LD1、LD2与质粒作用30min后电泳,EB染色观察,LD1、LD2彻底降解了质粒。倍比稀释的LD1、LD2分解质粒的作用减弱,可以看到仍有微弱的质粒条带出现。LDs对质粒有明显的降解作用,从图1中看不出LD1、LD2对质粒的降解作用有明显的差别。 3.4LDs对λDNA的降解作用(见图2) LDs与λDNA作用30min后进行0.8%琼脂糖凝胶电泳,EB染色后分析结果。LD1、LD2作用后的λDNA条带减弱,图2的下方有云雾状的阴影,为λDNA的降解产物。说明LD1、LD
7、2有降解λDNA的作用。图2中看不出LD1、LD2对λDNA降解作用有明显的差别。 4讨论 脱氧核糖核酸酶(DNase)已在不同的物种中发现,目前针对其研究较多的是DNaseⅠ、DNaseⅡ。DNaseⅠ是Sachs[6]1905年首次在牛胰腺中发现,现对DNaseⅠ的研究已扩展到人、鸡、鼠、犬及鲤鱼等动物。已纯化出不同的DNaseⅠ的分子量在32～41kDa范围之间,等电点在3.9～4.7之间。DNaseⅡ存在于各种哺乳动物的组织中[7],尽管来自各种不同种属和组织的DNaseⅡ的化学性质并不完全一
8、样(如分子量、亚基结构),但这些酶的酶学性质非常相似。迄今已纯化出不同的DNaseⅡ的分子量范围在26.5～45kDa之间。我们发现的LD1、LD2分子量为126、62kDa；等电点为6.12、6.05。LDs与DNaseⅠ、DNaseⅡ分子量有很大差别,分子量远远大于DNaseⅠ、DNaseⅡ；LDs的等电点也明显不同于DNaseⅠ。可以推测,LDs是新型的脱氧核糖核酸酶,具有不同的性质。 质粒是细菌染色体以外能自主复制的
