dna条形码在蛤蚧真伪品鉴定中的前景

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1、DNA条形码在蛤蚧真伪品鉴定中的前景【关键词】蛤蚧;DNA条形码;中药鉴定　蛤蚧，传统名贵滋补中药材，于壁虎科动物大壁虎Gekkogecko(Linnaeus)(隶爬行纲Reptilia，有鳞目Squamata，壁虎科Gekkonidae，壁虎属Gekko)除去内脏的干燥体，其性平、味咸，归肺、肾经，具有补肺益肾、纳气定喘、助阳益精之功效，多用于治疗肺虚气喘、劳嗽咳血、阳痿遗精等症[1]。　　蛤蚧作为中药材使用具有悠久的历史，市场需求量大。然而，由于自然环境的变化和人为因素干扰，蛤蚧野生资源正遭到严重破坏，产量急剧下降，导致出现“

2、越捕越贵，越贵越捕”的怪圈[2]。同时，由于蛤蚧药材价格昂贵，为谋求暴利，一些药贩常以假充真，导致市场上蛤蚧伪品增多。据不完全统计多达数十种，常见伪品有小蛤蚧(壁虎Gekkochinensis，无蹼壁虎G.sesotritonchinensis)、蛤蚧蛙(多疣壁虎G.japonicus)、细蛤蚧(荔波壁虎G.liboensis)、土蛤蚧(睑虎Goniurosauruslichtenfelderi、西藏沙蜥Phrynocephalustheobaldi、红瘰疣螈Tylototritonverrucosus、贵州疣螈T.kalayan

3、a)、马鬃蛇(变色树蜥Calotesversicolor)、红点蛤蚧(蜡皮蜥Leiolepisreevesii)、沙蜥(青海沙蜥P.vlangalii)、石龙子(中国石龙子Eumeceschinensis)、羌活鱼(山溪鲵Batrachuperuspinchonii)、四脚鱼(东方蝾螈Cynopsorientalis)等[3]。如此种类繁杂的伪品的出现，使得本已缺乏监管的中药材市场更加混乱，导致中药材蛤蚧的质量难以保证，严重影响其临床使用的安全。故此，对蛤蚧真伪品的鉴别问题已日趋严峻，建立一套准确、高效且切实可行的鉴别方法对蛤蚧中

4、药材市场的监管较之以往的任一时期更为迫切。到目前为止，针对蛤蚧及其伪品的鉴别方法众多，主要有性状鉴别、显微鉴别、理化鉴别和分子生物学鉴别等。本文对这些方法进行了汇总，并就其各自的优点及不足进行了归纳。针对这些方法所存在的局限性，引入近年迅速崛起的学科前沿——DNA条形码(DNABarcoding)技术，并就其在蛤蚧鉴定中的优势及可行性进行介绍。　　1蛤蚧真伪品鉴定方法回顾　　1.1性状鉴别性状鉴别指人们依据各种药材的性状差异，对药材的形、色、味、大小等特征进行观察，区分药材真、伪、优、劣的方法。该鉴定方法需要完整的蛤蚧，根据蛤蚧的

5、长度、鳞片、眼睑、头部、背腹部、指趾、尾部等差异进行鉴别。如：朱华等[3]对蛤蚧商品市场进行了调查，并收集了各类商品蛤蚧共18种，选择样品长度、头部、吻鳞、眼睑、鳞片、背腹部、指趾、尾及其他特征、地理分布等特征进行原动物鉴定，并根据这些性状编定了鉴定18种蛤蚧及其混伪品的检索表，借此将蛤蚧及其伪品相区分。同类报道还有许多[4~6]。性状鉴别是传统中药鉴定的主要方法，由于其直观简便，在蛤蚧的鉴定中仍在使用。但是，性状鉴别有很强的专家经验依赖性，并且对多药材、破碎药材、粉末药材以及中成药的鉴定有一定的局限性[7]。大多数的伪品就是利用

6、其与真品的相似性而蒙混进入中药市场，且出现了一些药材移花接木的现象[8]，使得该方法面临更多因难。　　1.2显微鉴别显微鉴别是利用显微镜观察药材的组织切片、粉末、解离组织或表面制片及成方制剂中药材的组织构造、细胞形状或内含物等特征的一种方法。在蛤蚧显微鉴定中，该方法主要是观察其鳞片、皮肤碎片、骨碎片等差异进行鉴定。例如：朱华等[9]对中药商品蛤蚧及海蛤蚧(红瘰疣螈)进行了鳞片显微观察，并对其特征进行了描述;侯丽光[10]对正品蛤蚧粉末的鳞片、皮肤碎片、骨碎片和横纹肌纤维的特征进行显微观察并描述，为蛤蚧真伪品鉴别提供了旁证资料。显微

7、鉴别方法适用于破碎状、粉末状及丸、膏、丹等中成药样品，在一定程度上弥补了性状鉴别的不足。但是中药蛤蚧常以干燥全体入药，使得显微鉴定在蛤蚧真伪鉴别中应用范围较小。同时显微鉴定也具有一定的经验和理论水平的局限，并且蛤蚧的显微鉴定方法尚未形成既定的标准，因此应用此方法来鉴定蛤蚧仍有困难。　　1.3理化鉴别所谓理化鉴别是通过物理、化学方法或仪器分析药材中存在的某些化学成分及性质，以此来鉴定药材的真伪和质量。特别值得一提的是近年呼声较高的指纹图谱分析，即通过一定的分析手段，得到能够标示其化学特征的色谱图或光谱图。该类方法在蛤蚧及其伪品的鉴别

8、中也有较多运用，如廖汉成等[11]采用薄层色谱法对经超微粉碎后的蛤蚧超微饮片样品与蛤蚧药材进行薄层层析对比;朱华等[9]对商品蛤蚧(广西蛤蚧和泰国蛤蚧)及其混伪品海蛤蚧(红瘰疣螈)进行了紫外光谱和高效液相色谱等方法鉴别;王丽娟等[12]对蛤蚧及其伪