草苁蓉提取物对阿尔茨海默病模型大鼠海马神经干细胞巢蛋白及学习记忆的影响

《草苁蓉提取物对阿尔茨海默病模型大鼠海马神经干细胞巢蛋白及学习记忆的影响 》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、草苁蓉提取物对阿尔茨海默病模型大鼠海马神经干细胞巢蛋白及学习记忆的影响周丽莎朱书秀王小月【摘要】目的探讨草苁蓉提取物对β淀粉样肽（β-AP）所致阿尔茨海默病(AD)模型大鼠的脑内巢蛋白（Nestin）表达的影响，并对其保护作用提供理论依据。方法取健康的SD大鼠60只，随机分为正常组、假手术组、模型组和草苁蓉提取物高、中、低剂量组。用Aβ1～40微量注射至大鼠双侧Meynert基底核，建立AD模型，用草苁蓉提取物进行治疗，于治疗后用Morris水迷宫检测大鼠的学习记忆能力，用免疫组化染色法检测Nestin阳性神经细胞数的表达。结果各治疗组的逃避潜伏期较模型组明显缩短，大鼠在原平台象限游

2、泳时间占整个游泳时间的百分比显著升高，穿过原平台所在位置的次数明显增加（P0.01）。草苁蓉提取物高剂量组大鼠海马区Nestin阳性神经元数量在治疗组中表达最强，与模型组相比，具有显著性差异（P0.01）。结论草苁蓉提取物能增强AD模型大鼠海马神经干细胞Nestin的表达，提高AD大鼠的学习记忆能力，其机制尚需进一步研究。【关键词】草苁蓉阿尔茨海默病模型巢蛋白阿尔茨海默病（Alzheimerdisease,AD）是发生在早老及老年期、不可逆转的、渐进性的、以精神行为异常为主的脑变性疾病。其特征性病理标志为脑内细胞外存在大量由淀粉样β蛋白（beta-al(折合生药0.03g/ml)灌胃

3、，中剂量组给予每只大鼠中药草苁蓉的提取物2ml灌胃，高剂量组给予每只大鼠中药草苁蓉的提取物4ml灌胃，每组10只，连续28d。2.2动物模型的制作大鼠在10%水合氯醛380mg/kg腹腔注射麻醉后，固定于脑立体定位仪。脑立体定位仪固定平颅头位切开皮肤及皮下组织，用棉签蘸取少量双氧水轻拭颅骨表面，清除泡沫能清晰显现前囟，参照大鼠脑立体定位图谱，以前囟为原点，向后1.4mm，旁开3.0mm为穿刺点转穿颅，自脑表面进针7.0mm分别至双侧Meynert基底核，用微量注射器将聚集状态的Aβ1～40各1μl（5μg）在2min内缓慢注入，留针10min，以使Aβ1～40充分浸润局部组织，注射完

4、毕后将微量注射器在7min内缓慢抽出。假手术组注射等量的生理盐水。所有操作均在无菌条件下进行，术后每只大鼠腹腔注射青霉素1万单位，缝合切口，常规饲养。2.3学习记忆观察治疗后进行Morris水迷宫训练，首先进行定位航行试验，历时3d，将大鼠面向池壁分别从4个入水点放入水中若干次，记录其寻找到隐藏在水面下平台的时间，即逃避潜伏期。如果大鼠在120s内未找到平台，需将其引至平台。这时潜伏期为120s。然后于第4天撤除平台进行空间探索试验，任选1个入水点将大鼠放入水池中，考察大鼠对原平台的记忆，记录其穿过原平台所在位置的次数及在原平台象限的游泳时间和距离。训练期间水温（26±1）℃。数据采

5、集和处理由Morris水迷宫图象自动监视处理系统完成。将各组的成绩进行比较。2.4标本采集最后1次Morris水迷宫测试24h后灌注取海马。大鼠用10%水合氯醛380mg/kg腹腔注射，麻醉后立即开胸暴露心脏，经左心室插管至主动脉，同时剪开右心耳，快速灌注生理盐水，至肝脏变白改灌注液为4％多聚甲醛，灌注时间约30min，见大鼠尾巴、四肢僵硬视为满意；灌注完毕后断头取脑，参照大鼠脑立体定位图谱分离海马，投入4％多聚甲醛溶液中过夜，石蜡包埋。2.5Nestin检测取大鼠海马区石蜡标本，以4%多聚甲醛固定15min，PBS洗2min×3次。再加蒸馏水新鲜配置0.5％H2O2，室温30min

6、以灭活内源性过氧化氢酶。双氧水洗2min×3次。滴加正常山羊血清，室温20min。甩去多余液体，不洗。滴加一抗Nestin（1∶800），以PBS代替一抗作阴性对照，37℃下孵育1h，PBS洗2min×3次。滴加生物素化二抗IgG（山羊抗兔）37℃30min。PBS洗2min×3次。滴加SABC，20～37℃20min。PBS洗5min×4次。DAB显色。蒸馏水反复洗涤。脱水，透明，封片。标本于显微镜下观察照相并计数。2.6图像分析及统计学处理采用NikonSpot图像采集分析系统进行图像分析，在400倍高倍镜下每张切片随机选择10个视野观察。实验数据用SPSS13.0软件进行统计学

7、处理。数据以±s表示，两组间比较用t检验，多组间比较用单因素方差分析(ANOVA)及q检验。3结果3.1各组水迷宫测验成绩的比较见表1。与正常组及假手术组相比，模型组逃避潜伏期明显延长，撤离平台后大鼠在原平台象限内游泳时间占整个游泳时间的百分比显著降低，穿过原平台所在位置的次数明显减少，差异具有显著性；各治疗组与模型组相比，逃避潜伏期明显缩短，大鼠在原平台象限游泳时间占整个游泳时间的百分比显著升高，穿过原平台所在位置的次数明显增加，具有显著性差异。表1各组