家畜传染病学教学实习

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1、实习一猪瘟的诊断目的了解和掌握猪瘟的现场诊断和实验室诊断方法内容及方法猪瘟的诊断程序人工感染或自然病例观察症状荧光抗体诊断观察病理变化扁桃体、淋巴结、脾采集病料脾脏兔体交互免疫试验剖检称重、匀浆制备1：10的组织悬液加双抗4℃下作用6h肌肉注射实验家兔3只，5mL/只对照组家兔3只，注射生理盐水5mL/只观察测温7天耳静脉注射100倍稀释的猪瘟兔化弱毒1mL/只测温4天，每天4次绘制两组兔的体温曲线判定结果冰冻切片冷丙酮固定4°C10min猪瘟荧光抗体染色37°C作用30minPH8.0PBS液涮洗5mi

2、n0.1％伊文斯兰复染3s—5sPH8.0PBS液涮洗2min碳酸盐缓冲液封裱荧光显微镜下观察判定结果一猪瘟病例的人工感染（一）种毒：为购自中国兽药监察所的猪瘟中国石门系强毒，采集高热期抗凝血保存，或采集病死猪的脾脏、淋巴结研磨处理，按稀释1：10倍稀释，加双抗处理后使用。14（一）感染用猪：应选用断奶后未经猪瘟疫苗免疫的猪。（二）感染方法：用血毒或脾、淋毒，肌肉注射、滴鼻、口服，每头共计4mL。（三）感染时间：最好于试验前6～7天（1周）进行。一般2～3天潜伏期，7天后就可死亡。二观察临床症状，剖检观察

3、病理变化，采集病料（一）临床症状最急性型：突然发病，症状急剧，主要表现高温稽留，皮肤和黏膜有紫绀和出血，与一般败血症无异，一至数天死亡。急性型：1．突然发病，食欲显著减少或完全停食，喂食时，不表现饥饿感，徐徐走近食槽，缓慢嚼食，但食数口后，即退出卧下，有的病猪连续多天完全停食，有时呕吐。2．精神高度沉郁，伏卧嗜眠，肌肉震颤，常挤卧于一隅或钻入草堆，呈怕冷状，触动时或发低沉的叫鸣而不动，或徐徐站起，走几步后，又卧地，或表现敏感，发出尖锐的叫声，站立或行走时，背腰弓起，四肢软弱无力，发抖，行动缓慢，摇摆不稳。

4、3．体温升高至41℃以上，高的可达42℃以上，稽留不退，死前降至常温以下，在体温升高时，白细胞减少，约13000以下，甚至仅有3000，一般以发病后4～7天最低，血小板也减少。4．两眼无神，开张不全，常有多量粘液—浓性分泌物，清晨可见两眼粘封，不能开张，结膜潮红发炎，后期结膜苍白，常有出血斑点，口腔黏膜苍白或发绀，唇内面、齿龈、口角、会厌、喉头和阴道等处的黏膜可能有出血斑点。5．皮肤通常充血，末期多呈现贫血状态，有些部位如鼻端、嘴唇、耳、下颌、四肢、外阴等处，可能出现紫绀区或出血变化，公猪包皮内积有尿液，

5、挤压时流出浑浊发臭的尿液。6．初便秘后腹泻，初期粪便干结，呈小球状，后期腹泻状粪便，病程长的便秘和腹泻交替出现。7．病程为1～3周，后期常并发细菌感染，以肺炎和坏死性肠炎最为多见。8．有的病猪主要表现神经症状，嗜眠、磨牙、全身痉挛、体躯强直、不易起立、运动障碍。亚急性型：似急性型，但较缓和，有时好转，病程约3～4周。慢性型：消瘦，贫血，衰弱，伏卧，时有轻热，食欲不振。便秘和腹泻交替，有的皮肤有紫斑或坏死痂，病程在一月以上。（二）病理变化急性型：1．淋巴结的变化比较特殊，以腹腔淋巴结最为明显，表现肿大充血，

6、呈暗红色，切面多汁，呈弥漫性出血，边缘部分尤为显著，杂有贫血变化，因而呈大理石状。2．肾色较淡，出血斑点分布在皮质，髓质少见，肾盂和肾乳头也常见到。143．脾不肿大，边缘呈出血性梗死，有突起小块，色紫黑。有时为边缘性出血带。4．胆囊黏膜可能有出血斑点或坏死。5．肺充血出血、支气管肺炎。6、扁桃体常有炎症，初期轻，后期发展成为两侧性坏死性炎症。7、喉头和膀胱黏膜也常见出血点。慢性型：主要为坏死性肠炎，一般见于回肠末端，盲肠和结肠的黏膜上，炎症从淋巴滤泡开始，向外发展，因而形成同心轮层状的钮扣状溃疡，突出于黏

7、膜面，色褐或黑，中央低陷，有的有剥脱现象。（三）病料采集：脾、淋巴结、扁桃体、肝、肾。三、病料研磨与处理脾称重剪碎研磨稀释（W/V）1：10反复冻融3次双抗处理（1000u/mL）4℃作用6h以上离心取上清液-20℃保存。四、病料冰冻切片1．连接好半导体致冷器和切片机后，检查水管是否接好，先开冷却水，再开致冷器，预热３min~５min。２．将致冷键置于刀台共冷上，调节电流到15~20mＡ处，刀台即开始逐渐冷却。３．调节切片厚度至４um～５um。４．待台上结霜后将修好的组织块贴于台上，待组织块冻实后，转动手

8、动摇把，先修正组织块，再切片，迅速将切下的组织薄片贴于玻璃片上。５．自然干燥或风干后，用冷丙酮固定，４℃１５min。6．取出晾干或风干，贴标签，用纸包好，外用厚而不漏水的塑料袋密封，置４℃保存。五．病料上清液接种家兔（兔体交互免疫试验）观察测温3天，2-3次/天一组6只体温应正常健康家兔12只二组6只接种病料上清液肌注5mL/只试验组3只对照组3只一组测温5~7天试验组3只对照组3只二组8h一次，3次/日接种生理盐水5mL/只