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1、4重组CHO细胞不同接种密度对最终蛋白产量的影响本科毕业论文题目重组CHO细胞不同接种密度对最终蛋白产量的影响学院生命科学技术学院专业生物技术（制品方向）毕业届别2015届姓名杨德成指导教师杨志杰职称讲师4重组CHO细胞不同接种密度对最终蛋白产量的影响目录摘要-1-关键词-1-Abstract-1-Keywords-1-前言-2-1实验材料与方法-3-1.1实验材料-3-1.1.1实验仪器-3-1.1.2实验材料，试剂-4-1.2实验过程-4-1.2.1重组CHO细胞的准备-4-1.2.2重组CHO细胞的接种-4-1.2.3重组CHO细胞培
2、养过程-4-1.2.4重组CHO细胞的蛋白检测-5-1.2.5对最终产物蛋白的测定-5-2实验结果分析-5-2.1重组CHO细胞不同接种密度的活细胞数-5-2.2重组CHO细胞不同接种密度的活率变化-6-2.3重组CHO细胞不同接种密度的最终蛋白产量变化分析-6-3讨论-7-参考文献-8-致谢..-9-4重组CHO细胞不同接种密度对最终蛋白产量的影响重组CHO细胞不同接种密度对最终蛋白产量的影响杨德成（甘肃农业大学生命科学技术学院生物制品专业，甘肃兰州：）摘要：目的：研究重组CHO细胞不同接种密度对最终蛋白产量的影响。方法:用分批补料式培养
3、（Fed-Batch）的培养工艺，CD012化学界定培养基，将重组CHO细胞按不同密度接种在50mlTPP管中，工作体积30ml，在细胞生长到4/6/8/10天时，分别加入细胞工作体积的5%/，2%，/5%，/2%的CDFeed002培养液，待细胞活率低于60%，结束实验，测得细胞上清液的蛋白产量。结果：1.0×106cells/ml接种密度的重组CHO细胞蛋白产量最高。关键词：重组CHO细胞，不同接种密度，无血清培养基，蛋白产量，Fed-BatchRecombinantCHOcells,theinfluenceofdifferentsee
4、dingdensityonthefinalproteinproductionDe-chengYang(Gansuagriculturaluniversity,collegeoflifescienceandtechnology,biologicalproductsmajor,lanzhou,gansuprovince,)Abstract:objective:TostudytherecombinantCHOcellstheinfluenceofdifferentdensityonthefinalproteinyield.Method:Touse
5、etheFed-Batchprocess,Chemicallydefined012medium,seedingthedifferentdensityrecombinantCHOcellsein50mlTPPtube.theworkvolumeis30ml,in4/6/8/10days,feed5%2%,5%,2%CDFeed002culturerespectively,whencellsviabilityislowerthan60%,endtheexperiment,14重组CHO细胞不同接种密度对最终蛋白产量的影响Thenmeasured
6、theproteinproductionofthecellsupernatant.Results:Theproteinyieldof1.0x106cells/mlseedingdensityisthehighestKeywords:recombinantCHOcells,differentdensity,Chemicallydefinedmedium,proteinyield,theFed-Batch前言本次实验所选用的是重组CHO细胞，但是最初的CHO细胞[1,2]是由1957年美国科罗拉多大学Dr.TheodoreT.Puck从一成年雌
7、性仓鼠卵巢分离获得。CHO细胞是上皮贴壁型细胞，具有不死性，可以传代百代以上，是生物工程上广泛使用的细胞系。CH0细胞在基因工程使用中还有一个优点，该细胞属于成纤维细胞(fibroblast)，是一种非分泌型细胞，它本身很少分泌CHO内源蛋白，因此对目标蛋白分离纯化工作十分有利。CHO细胞是表达复杂生物大分子的理想宿主。CHO细胞虽可像微生物细胞一样，在人工控制条件的生物反应器中进行大规模培养，但其细胞结构和培养特性与微生物细胞相比，有显著差别：动物细胞比微生物细胞大得多，无细胞壁，机械强度低，对剪切力敏感，适应环境能力差；倍增时间长，生长
8、缓慢，易受微生物污染，培养时须用抗生素；培养过程需氧量少；培养过程中细胞相互粘连以集群形式存在；代谢产物具有生物活性，生产成本高，但附加值也高。我们实验所用的重组CHO细胞是经过
