硕士毕业论文-广谱高效微生物防腐剂产生菌的筛选及应用

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1、学校代码10463密级□硕士学位论文广谱高效微生物防腐剂产生菌的筛选及应用作者姓名指导教师教授副教授学科门类理学学科专业微生物学培养单位生物工程学院完成时间二〇一三年五月VScreeningofBroad-spectrumBiocontrolSubstanceProducingStrainandApplicationADissertationSubmittedfortheDegreeofMasterCandidate：Supervisor：Prof.AssociateProf.CollegeofB

2、ioengineeringHenanUniversityofTechnology,Zhengzhou,ChinaVV摘要微生物导致食品的腐败变质不仅会造成巨大经济损失，还会引起严重的食品安全问题。而现有的食品防腐保鲜方法在实际生产应用中具有一定的局限性，迫切需要寻求更安全有效的防腐保鲜新技术，将微生物及其代谢产物应用于食品防腐保鲜的生物防治方法是现阶段研究的热点。从轮马热泉、北海温泉、大塘热泉等腾冲温泉附近采集土壤样品23种，采用稀释分离法分离纯化得到细菌菌株142株。以大肠杆菌、黑曲霉、禾谷镰刀

3、菌等为指示菌，采用滤纸片法或平板对峙法从142株细菌菌株中初步筛选得到具有广谱抑菌效果的菌株7株，其中菌株LM2303广谱抑菌效果最好。通过形态特征分析、生理生化特性分析和16SrDNA序列比对，菌株LM2303应为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)。采用紫外线诱变、硫酸二乙酯诱变和微波诱变对菌株LM2303进行选育。其中，经硫酸二乙酯诱变处理得到突变菌株D59，其抑菌效果较原始菌株提高了11.4%。以抑菌物质产量为指标，从8种基础培养基中筛选出菌株D59最佳发酵培养基M2。采用单因

4、素实验和响应面分析对菌株D59进行发酵条件优化。单因素试验结果表明培养时间、温度和转速对菌株D59抑菌物质产量有显著影响(p<0.05)。利用响应面确定菌株D59的最佳培养条件为：接种量5%、装液量100mL/250mL、培养时间43h、温度33℃、转速177rpm。在上述发酵条件下培养，100mL发酵液可得到抑菌物质粗提物2.8560g(湿重)，是原发酵条件下的1.4倍，有效提高了抑菌物质产量。采用盐酸沉淀、甲醇萃取，从拮抗菌株发酵液中得到抑菌物质粗提物。利用薄层色谱对抑菌物质进行分析和初步纯化

5、，紫外及茚三酮显色结果表明抑菌物质含有苯环和闭合肽键。红外光谱扫描结果表明菌株LM2303抑菌物质为环状脂肽类物质。该脂肽类物质理化性质稳定，抑菌谱广，对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等细菌和黑曲霉、黄曲霉、扩展青霉、禾谷镰刀菌等真菌均有较强的抑制作用。从不同腐烂病症的冬枣上分离得到根菌索菌、细极链格孢、橄榄色盾壳霉、扩展青霉四种致腐真菌。平板对峙试验结果表明菌株LM2303可有效抑制上述四种真菌的生长，菌株LM2303具有冬枣贮藏期致腐真菌的生物防控应用潜力。…………………关键词：枯草芽孢杆菌；拮抗；

6、抑菌物质；诱变选育；发酵条件优化VVVABSTRACTFoodspoilagecausedbypathogenicmicroorganismsnotonlyresultsingreatfinanciallosses,butalsoseriousfoodsafetyproblems.Andexistingfoodantisepsismethodinpracticalapplicationhascertainlimitations,toexploreanobvioussafeandeffectivea

7、nticorrosiontechnologyisparticularlyimportant.Microorganismsandtheirmetabolitesworkforfoodconservationisaresearchfocusofbiologicalcontrolatthepresentstage.142strainsofbacteriawereisolatedfrom23soilsampleswhichcollectedformTengchonghotspring,suchasLun-

8、mahotspring,Bei-haihotspring,Da-tanghotspringandsoon.Filteringpapermethodanddualculturetechniquewereemployedtotestantagonisticeffectofbacteriastrains,andsevenofthemshowedefficientinhibitory,strainLM2303hasthemostobviousinhibitoryeffect.StrainL