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时间:2017-09-25
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1、不同产地花生壳中木犀草素的HPLC测定张婷07级药学专科1班学号070529007摘要:花生壳是花生加工过程中的副产品,资源丰富,价格低廉,含有木犀草素等药理活性成分,如能以花生壳为原料来提取木犀草素,或生产含木犀草素的产品,将产生较好的经济效益和社会效益。为此,我们研究了花生壳中木犀草素含量测定的高效液相色谱方法(HPLC)。经过研究,测定方法为:药材用甲醇超声处理方法提取,以C18烷基键合硅胶为填料,甲醇-水-乙酸(50:50:1)为流动相,流速0.8ml/min,检测波长254nm。在此条
2、件下,木犀草素峰理论塔板数大于5000,分离度大于2.0,加样回收率101.2%。该方法样品处理简单,测定结果准确可靠,可用于花生壳制剂的质量分析和质量控制。从国内7个省区的17份花生壳样品测定结果分析,各地花生壳的HPLC图谱基本一致,均以木犀草素为主要的成分,含量在0.25%~1.12%之间,其中以山东、河南等地花生壳中木犀草素的含量较高。研究结果表明,花生壳是提取木犀草素的良好原料,有开发价值,本文研究结果为以花生壳为原料研发、生产相应的制剂产品,提供了质量控制的方法和技术手段;也为开发丰
3、富的花生壳资源,提供了科学依据。关键词:花生壳;木犀草素;含量测定;HPLC1引言豆科植物落花生ArachishypogaeaL.是重要经济作物,我国各省区均产,年产量达14500kt,占世界产量的42%以上[1]。目前,其资源利用主要是花生果仁,在获取花生仁的加工过程中,每年产生副产品花生壳约4500kt,其中大部分被当作燃料或废弃物,仅有少部分用于饲料或化工原料,资源利用率非常低。花生壳含有木犀草素(luteolin)、β-谷甾醇(β-sitosterol)、胡萝卜苷(daucosterol
4、)等化学成分[2-3]。其中以木犀草素为主,也是主要的药理作用成分。木犀草素化学结构为5,7,3’,4’-四羟基黄酮,是多酚羟基取代化合物,具有抗氧化、增加冠脉血流量、降血压、降血脂等药理作用[3-6]。利用其抗氧化、降血脂等药理作用,开发天然抗氧化剂,抗衰老、调血脂等功能食品,是值得重视的研发领域。花生壳中含有较多的木犀草素,若能以价格低廉,资源丰富的花生壳为原料来提取木犀草素,或生产含木犀草素的产品,使花生壳变废为宝,增加农民收入,将产生较好的经济效益和社会效益。为此,我们建立了用HPLC(
5、高效液相色谱)测定花生壳中木犀草素含量的方法,并测定了在国内7个省区收集的17份花生壳样品中木犀草素的含量。2木犀草素的测定方法概述有关中草药中木犀草素的含量测定,目前报道的方法有库仑滴定法[7]、薄层色谱扫描法[8]和高效液相色谱法[9]。库仑滴定法是利用硅胶G薄层色谱先分离木犀草素,从薄层板上刮下色带,在电解池阳极区放置8~10ml电解液,阴极区加同一电解液至两边液面平衡,选择适当电流经电解后,在阳极区加入木犀草素色带硅胶进行电解,由阳极上所产生的Br2与样品反应,达到终点后,稍有过量的溴存
6、在立即使死停终点指针偏移,停止电解并记录时间,由此测定含量。薄层扫描法是提取样品中木犀草素,制备供试品液,用硅胶G薄层色谱分离木犀草素,展开条件为氯仿-甲醇-甲酸(20:4:0.8)上行展开。色谱不经显色,直接扫描,扫描条件为反射式单波长锯齿扫描,λs=440nm,狭缝1.25mm×1.25mm,线性系数SX3,根据峰面积计算含量。高效液相色谱法是将提取样品中木犀草素,制备供试品液,然后用HPLC测定含量,色谱条件为:C18键合硅胶填料柱,流动相为甲醇-水-乙酸(70:30:0.4),检测波长为
7、254nm,流速0.8ml/min。上述方法中,库仑滴定法比较烦琐;薄层色谱扫描法由于方法本身在色谱过程中重现性差等方面的缺陷,均不如HPLC法准确、可靠。目前,花生壳中总黄铜的含量测定,已有报道,但花生壳中木犀草素的含量测定方法及含量测定,尚未见报道。3实验方法与结果3.1实验材料和仪器3.1.1实验材料药材及试剂花生壳药材样品在国内7省区收集,共17份(表1),经鉴定,样品均为豆科植物落花生ArachishypogaeaL.的干燥成熟果壳。木犀草素对照品购于国家药品和生物制品检定所(含量测定
8、用)。提取用甲醇等试剂为分析纯,水用反渗滤纯水,流动相用色谱纯试剂。3.1.2实验仪器仪器设备科导超声波提取器;梅特勒1/10万电子天平;岛津2401PC光度计;HP-1100液相色谱仪(配套双元泵,紫外检测器,自动进样器以及色谱工作站)。3.2色谱条件色谱柱:AlltechC18柱,柱温25℃;流动相甲醇-水-乙酸(50:50:1),流速0.8ml/min;检测波长254nm。3.3系统适应性试验色谱柱选择HPLC测定最常用的C18键合硅胶柱。检测波长经紫外光谱测定,木犀草素在254nm有最大
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