桃褐腐病生防细菌fd6硝吡咯菌素合成基因簇的克隆及prna功能分析

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1、园艺学报，2016，43(8)：1473–1481.ActaHorticulturaeSinicadoi：10.16420/j.issn.0513-353x.2016-0047；http：//www.ahs.ac.cn1473桃褐腐病生防细菌FD6硝吡咯菌素合成基因簇的克隆及prnA功能分析1,*111112张清霞，何玲玲，单海焕，童蕴慧，陈夕军，纪兆林，刘凤权12（扬州大学园艺与植物保护学院，江苏扬州225009；江苏省农业科学院植物保护研究所，南京210014）摘要：荧光假单胞菌（Pseudomonasfluorescens）FD6分离自福建

2、闽侯青口青菜根围土壤，采用凹玻片法和离体果实接种法测定菌株FD6对桃褐腐病菌（Moniliniafructicola）的抑制能力。PCR法克隆硝吡咯菌素合成基因簇结构基因（prn），利用同源重组构建prnA缺失突变体并分析其功能。结果表明，菌株FD6处理桃后可完全抑制桃褐腐病发生；细菌悬浮液对褐腐病菌分生孢子的萌发抑制率达93.18%，细菌培养滤液的抑制率为69.36%；细菌悬浮液对黄瓜根结线虫也具有较强的致死作用。序列分析表明荧光假单胞菌FD6硝吡咯菌素合成基因簇全长为5868bp，内含4个开放阅读框prnA、prnB、prnC和prnD，这4

3、个基因组成1个共转录单元。系统发育进化树显示菌株FD6与P.protegensCHA0、Pf-5的prn基因相似性达94%。利用遗传学方法证实prnA基因是硝吡咯菌素合成的必需因子，此外该基因还影响2,4–二乙酰基间苯三酚和藤黄绿脓菌素的合成。关键词：荧光假单胞菌；桃褐腐病菌；硝吡咯菌素；基因克隆中图分类号：S662.1；S436.6文献标志码：A文章编号：0513-353X（2016）08-1473-09CloningofPyrrolnitrinSyntheticGeneClusterprnandprnAFunctionalAnalysisfr

4、omAntagnisticBacteriaFD6AgainstPeachBrownRot1,*11111ZHANGQing-xia，HELing-ling，SHANHai-huan，TONGYun-hui，CHENXi-jun，JIZhao-lin，2andLIUFeng-quan12（CollegeofHorticultureandPlantProtection，YangzhouUniversity，Yangzhou，Jiangsu225009，China；InstituteofPlantProtection，JiangsuAcademyofA

5、griculturalSciences，Nanjing210014，China）Abstract：PseudomonasfluorescensFD6wasisolatedfromthecanolarhizosphereinFujian.TodefinetheinhibitabilityofthestrainFD6toMoniliniafructicola，thecausalagentofpeachbrownrotwasdetectedusingmicroscopeconcaveslidesmethodandondetachedpeachfruit

6、s.ThepyrrolnitrinbiosyntheticgeneclusterwasclonedusingPCRamplification，andaprnA-deletionmutantwasgeneratedbyhomologousrecombinanttoidentifyitsfunction.TheresultsshowedthatstrainFD6couldcontrolcompletelybrownrotonpeachfruits.ThebacterialcultureofstrainFD6inhibitedthesporesofM.

7、fructicolagerminationsignificantlyby93.18%，whereastheculturalfiltrateofthestrainFD6onlyshowedalowerinhibitiontoM.fructicolaby69.36%.Thebacteriumcultureshowedthathighnematicidalactivity收稿日期：2016–03–28；修回日期：2016–08–04基金项目：江苏省重点研发计划（现代农业）重点项目（BE2015354）；江苏省农业科技自主创新基金项目[CX（15）103

8、7]；国家自然科学基金项目（C140601-31000875）*E-mail：zqx817@sohu.comZhangQing-xia，