免疫亲和柱技术在粮油卫生安全检测中的应用研究

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1、第39卷第2期Vol.39，No.2第32014年4月9卷2014年第2期GrainScienceandTechnologyandEconomyApr.2014免疫亲和柱技术在粮油卫生安全检测中的应用研究魏文忠，魏芹（安阳市粮油饲料产品质量监督检验所，河南安阳455000）［摘要］免疫亲和柱技术是一种有效的残留检测净化技术,可简化样品提取过程并高效提高样品的纯度，具有高亲和性、高专一性和可逆结合等特性，在粮油卫生安全检测中得到了广泛应用。对免疫亲和层析的原理、特性、关键技术作了详细的阐述,并对其在粮油卫生安全检测中的应用与进展进

2、行了介绍。［关键词］免疫亲和柱；浓缩；纯化；粮油卫生安全；检测免疫亲和柱（Immunoaffinitycolumn，IAC）是利时也可能因复杂的操作过程而污染了药品，降低了用免疫亲和层析原理制成用以分析检测抗体或抗药物的品质，另外在纯化和浓缩的过程中，有机溶剂原的亲和层析柱，是一种简化样品提取过程并提高的毒性及对环境的污染性都不可避免。样品纯度的样品前处理技术，可有效的分离和纯化而免疫亲和柱则将要被纯化的目标物的抗体偶各自互补的免疫物质。在粮油卫生安全检测中，免疫联在固态物质表面上（如纤维、玻璃珠或硅胶等），利亲和柱更多的用于对

3、真菌毒素的检测分析，现在市用抗原抗体反应的高亲和力、高专一性和可逆结合场已有多种真菌毒素的商品化亲和柱，使用效果非的特性，进行分析检测。IAC通过这种特性，从复杂常好，而这些IAC常被用作检测分析样品前处理的的混合物环境中分离提取出目标物及其类似物（交纯化管柱。叉反应物）。也可利用抗体对目标物和其类似物的亲和力不1免疫亲和柱技术的原理及其特性同，通过改变移动相的条件而将它们层析分离开，采免疫亲和柱技术原理是柱子中含有连接单克隆用分级梯度洗脱的方式来进行。其步骤是根据移动抗体的凝胶悬浮物，这种抗体对某种物质有特异吸相的条件，先利用

4、洗脱力较弱的移动相，将样品中附性。当含有这种特异吸附性的待测物流过免疫亲的目标物和类似物吸附在固定相上，其他物质被洗和柱时，被柱子中的抗体所吸附，结合提取，然后再脱出管柱；随后改变洗脱条件，将目标物及其类似物采用淋洗、静化等适当措施，去掉非目标分析物后，逐一冲出亲和柱，达到萃取、纯化、分离及检测目标使被测物被选择性提取与浓缩，所得提取物可直接物的目的。利用IAC的这些特点，可以简化样品处采用GC、HPLC、ELISA等方法进行检测。理和检测的时间，可以避免有机溶剂的大量使用，对与普通的免疫色谱技术相比，免疫亲和柱技术［1］操作人

5、员的健康及环境不会造成极大危害。具有高亲和性、高专一性和可逆结合等特性。一般的2免疫亲和柱技术在粮油安全检测中的应用免疫色谱技术在检测一些具有交叉反应的分析物时，存在无法分辨的缺点，分析物往往需要做进一步随着合成真菌毒素特异性抗体技术的不断提确认鉴定，再用其他的方法如气相-质谱法做再确高，可以获得越来越多的真菌毒素特异性抗体，利用认。如果交叉反应物与分析的目标物又互为光学异这些抗体制成的免疫亲和柱正成为一种新的前处理构物时，则质谱法也无法分辨，故免疫分析法一般只技术。而免疫亲和柱所具有的特异性，排除了样品中用于定性分析，无法实际

6、分离出目标物。而在使用液的大多数干扰因素，保证了真菌毒素与样品基质的相色谱法对一些光学异构物的分离时，由于固定相有效分离，使得降低检测方法的检出限、缩短检测时和色谱条件的问题，费时较长，对于浓度含量较低的间、减少溶剂用量成为可能［2］。因此，免疫亲和柱技分析物，要求首先纯化，再浓缩，增加了检测时间，同术可用于对粮食中真菌毒素的检测分析。收稿日期：2014-03-102.1对粮油中黄曲霉毒素B1的检测分析作者简介：魏文忠，男，本科，高级工程师，主要从事粮油饲料产品质量监督检验工作。影响免疫亲和层析效率的主要因素之一是基质32魏文忠

7、等：免疫亲和柱技术在粮油卫生安全检测中的应用研究第39卷2014年第2期的活化与抗体的偶联。杨春洪等［3］对黄曲霉毒素B成回收率低。通过实验，免疫亲和柱的最高吸附容量1抗体在这方面进行了研究。以表面带羧基的聚丙烯约115μg，黄曲霉毒素含量过载时，其吸附容量基本酰胺固相微球为载体，通过碳二亚胺（EDC）活化，共维持不变。因此，在实际检测时应根据黄曲霉毒素含价结合免疫黄曲霉毒素B1抗体。结果表明，最适偶量的大致水平，应适当对样液进行稀释，以达到最佳联pH值为6.0～6.5，最适反应时间为17～20h，最佳实验结果。EDC用量为5～

8、15mg/10mg微球，抗体的最大偶联效2.2对粮油中玉米赤霉烯酮的检测分析率达60.40%，为利用聚丙烯酰胺微球建立黄曲霉毒章英等［7］对抗玉米赤霉烯酮（ZEN）单克隆抗体素快速检测技术奠定了基础。免疫亲和柱进行了研究制备。通过抗原合成，小鼠免免疫亲和柱的特异