中国部分棉区棉花轮纹斑病病原菌种的初步鉴定

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1、棉花学报CottonScience2014袁26渊3冤院268~273中国部分棉区棉花轮纹斑病病原菌野种冶的初步鉴定张文蔚袁李莎袁简桂良袁司宁袁齐放军(中国农业科学院植物保护研究所/植物病虫害生物学国家重点实验室袁北京100193)摘要院从中国棉花主产区部分地区采集棉轮纹斑病叶袁分离获得17个致病链格孢渊spp.冤菌株遥根据链格孢菌菌体和孢子形态学观察结果袁结合ITS序列测定和分析结果袁明确A1等16个菌株为链格孢菌渊冤袁A3菌株为大孢链格孢菌渊冤遥关键词院棉花轮纹斑病曰链格孢曰形态学观察曰ITS序列测定中图分类号

2、院S435.621文献标志码院A文章编号院1002-7807渊2014冤03-0268-06ZhangWenwei,LiSha,JianGuiliang,SiNing,QiFangjun渊100193,冤17isolateswereobtainedfromtwomunicipalities袁anautonomousregionandfourprovincesinChina.Toclarifythespeciesofthem,bothobservationonmorphologicalcharacteristicsa

3、ndITSsequencingwereused.Theresultsshowedthat16isolatesincludingA1etc.wereidentifiedas,andA3isolatewasidentifiedas.cottonalternarialeafspot;spp.;morphologicalcharacteristics;ITSsequencing棉花轮纹斑病又称黑斑病渊Alternarialeaf及以色列发现了大孢链格孢引起的轮纹斑病遥[4]spot袁Blackleafspot冤袁1904年

4、Tanganyika首先报Palmateer等对美国阿拉巴马州的陆地棉进行了道发现于非洲东部袁多发于幼苗期子叶及成株期真菌区系调查袁发现棉花轮纹斑病菌渊叶片袁是棉花叶部病害中分布最广尧危害最大尧流冤是棉田中分离到的最常见的病害真菌遥[1]行频率很高的一种毁灭性病害遥该病害在中国国内对其病原菌及生物学特性的研究还较少袁特主要棉区均有发生袁尤其在北方棉区阴湿多雨的别是链格孢属级特征明显袁而种级特征变异较年份更易猖獗流行袁严重时可导致棉株叶片脱大曰传统分类以分生孢子为主要依据袁但链格孢落尧光秆尧枯死遥近年来袁随着抗虫棉不

5、断推广尧种菌的分生孢子梗及孢子的形态尧大小受环境影响植袁9月份以后在一些地区出现了以轮纹斑病为较大遥为此袁作者在采用传统的鉴定方法的同时袁[2-3]代表的叶部病害袁铃期至吐絮期有加重的趋势遥再辅以分子生物学手段袁根据ITS渊internaltran-棉花轮纹斑病致病菌属于半知菌亚门scribedspacer冤上的特异区段对链格孢野种冶进行渊Duteromyccotina冤袁丝孢纲(Hyphomycetes)袁丝孢快速鉴定袁对明确为害中国棉花的轮纹斑病病原目渊Hyphomycetoles冤袁链格孢属渊spp.冤遥菌的

6、种群结构具有重要意义遥国外对该病的病原菌研究较早袁如1979年埃及报道轮纹斑病是由细链格孢渊材料和方法Nees冤导致的遥1981年印度报道在草棉上发生的材料和试剂轮纹斑病是由大孢链格孢渊Zimm.冤从中国2个直辖市尧1个自治区和4个省袁即引起的遥此外袁还在美国的密苏里尧路易斯安那州北京尧天津尧新疆尧山东尧河北尧河南尧江苏袁部分地收稿日期院2013-12-11作者简介院张文蔚渊1973-冤袁女袁博士袁副研究员袁wwzhang@ippcaas.cn基金项目院国家自然科学基金渊31371898冤曰国家科技支撑计划项目渊2

7、012BAD19B05冤曰新疆科技支疆计划课题渊2011AB009冤3期张文蔚等院中国部分棉区棉花轮纹斑病病原菌野种冶的初步鉴定269区采集棉花生长中后期发病较重且症状典型的批制备袁并保证培养条件完全一致遥棉花叶片袁分离病原菌遥参考菌株为中国科学院rDNA-ITS序列测定普通微生物菌种保藏中心的链格孢标准菌株利用CTAB法提取菌株基因组DNA遥以真CGMCC3.4255渊中国农业大学吴菌核糖体ITS区段的通用引物ITS1渊5'-TCCG-学宏博士馈赠冤遥实验所用Taq酶尧pMD18-T载TAGGTGAACCTGCG

8、G-3'冤与ITS4渊5'-TCCTC-体尧连接酶尧感受态细胞等购自TAKARA公司曰CGCTTATTGATATGC-3'冤扩增供试菌株基因组DNA凝胶回收试剂盒购自全式金公司曰其他所用DNA的ITS区袁引物由英骏生物技术有限公司合2+试剂均为分析纯级别遥供试培养基为马铃薯葡萄成遥PCR扩增体系为25滋L院10伊Buffer渊PlusMg冤-1糖琼脂培养基渊